[发明专利]辐照交联异种皮脱细胞基质制备方法及其产品

说明书

技术领域

本发明属于医学用生物皮制品领域，具体地说属于生物皮脱细胞网状支架领域。

背景技术

生物材料在治疗大面积烧烫伤患者中具有重要作用。近年来，国内外皮肤专家一直在寻求良好的创面修复覆盖材料，以消除抗原性和排异反应为目的，制作异种皮冷冻保存，永久性皮肤创面替代材料是当前急需的新技术。为提高抢救大面积烧伤病人的疗效，具有广阔的前景。

在中国专利CN1266716A中公开了一种交联型猪脱细胞皮片。采用0.25％的胰蛋白酶在4℃下，浸泡16～24小时脱细胞，然后揭去表皮。之所以要这么长时间是因为在4℃下胰蛋白酶脱细胞水平极低，即使是这么长时间，也达不到完全脱除的目的。另外，表皮覆盖在真皮上，阻止了胰蛋白酶对真皮细胞的浸入，也对脱细胞不利。

在中国专利CN1522766A中公开了一种脱细胞真皮基质的制备方法，采用0.04～0.06％的胰蛋白酶在2～4℃下，浸泡16～20小时脱细胞，然后揭去表皮；再次浸入0.04～0.06％的胰蛋白酶在36.8～37.2℃下消化30~60分钟，之后预冷，在-70~-80冷冻和37~39℃融化的冻融，反复冻融3次，治如含抗生素的磷酸盐缓冲液中保存。该方法的缺点是：一、如此低浓度的胰蛋白酶在此温度下脱细胞不完全；二、反复冻融会损伤支架结构的柔软性和随意性。

在中国专利CN1268401C中公开了一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，也是将带有表皮的皮片加酶涂覆剂后放置长达18～50小时，脱细胞后再将表皮与真皮分离。最后采用剂量为6～30KGry/h⁶⁰Co所产生的γ射线辐照灭菌。由于表皮覆盖在真皮上，阻止了胰蛋白酶对真皮细胞的浸入，对脱细胞不利。另外，采用⁶⁰Co为放射源，即使装源50万居里，要想以6～30KGry/h的放射剂量满足对生物皮制剂的灭菌要求，需时长达15小时以上，在实际生产中会造成极大的不便。

在中国专利CN1732867A中公开了一种真皮面脱细胞、去抗原的敷料皮，是指对真皮部分进行脱细胞、去抗原的处理，而完整地保留了表皮的结构。严格地说，这不能算作猪皮脱细胞网状支架。

在中国专利CN1775189A中公开了一种脱细胞真皮基质及其制备方法，提出的用氢氧化钠和去污剂脱细胞的方案；该方案脱细胞的机理不明。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明旨在提供一种辐照无菌异种皮基质制备方法及其产品。

辐照无菌异种皮脱细胞基质制备方法，主要包括

1、取皮，用5％碘伏浸泡10～30分钟灭菌，脱毛，去脂，裁剪，用纯净水清洗，甩干至含水量15～25％之间；

2、上机切皮，真皮、表皮分离，取保留基底膜的真皮部分，厚度0.3～0.8mm，(0.5mm±0.04mm最佳)

3、脱细胞：

一脱：上述真皮部分首先用1~15％的氯化钠水溶液浸泡30分钟后用纯净水清洗；然后用10～20％的胰蛋白酶在36～40℃下，浸泡30～50分钟后用纯净水清洗；使细胞核与细胞壁分离后，用36～40℃生理盐水清洗2~4次甩干，再用纯净水清洗2~4次甩干，沥水30分。

一脱后脱去80％以上组织细胞，只留残余细胞核与细胞碎片；

二脱：将上述沥水后含水量在10～30％(25％最佳)的皮片，再用10～20％的脱氧核糖核酸酶(DNA酶)、10～30％的核糖核酸酶(RNA酶)先后交替地在36～40℃下，每次浸泡20～40分钟；各浸泡2～4次后，使细胞核与细胞碎片与细胞床完全分离；再用脱氧核糖核酸酶或核糖核酸酶0.5～1.5％，36～40℃下再次浸泡5～30分钟，使成纤维细胞与细胞床壁分离。

4、除去真皮内可诱发宿主细胞识别反应的物质：将前述处理后的材料用PH值7.5~8.5的纯水清洗甩干；采用常规固定剂，如福尔马林20％，25～36℃下，浸泡50～120分钟；

5、中间体检验：(显微镜下看)

物理性能——乳白色、有弹性、弯曲不断裂、微网状；

组织学结构：与正常人体真皮内的细胞外基质结构相同的真皮结构组织；

细菌和异菌检验：无菌

6、辐照灭菌：经过电子加速器或Co-60进行γ射线辐照灭菌。辐照剂量150万～400万拉德。照射时间60～180秒，(120秒最佳)，使产品成细网结构。放置皮片的吊具与放射源以20～60度角接触，距离10公分。

附图说明

图1是本发明制备方法制得的产品；

图2是实施例1患者术后半年愈合效果图；