[发明专利]一种酶法制备15NL－苯丙氨酸的方法

权利要求书

1. 一种酶法制备¹⁵NL-苯丙氨酸的方法，通过发酵获得含苯丙氨酸解氨酶的菌体，以¹⁵N-硫酸铵为标记氮源，与反式肉桂酸发生酶促反应，经分离纯化获得¹⁵NL-苯丙氨酸，未转化的标记氮源进行回收；具体步骤和方法为：

A菌体的发酵培养

将含苯丙氨酸解氨酶的酵母菌株，25-30℃下固体培养基中培养20-30小时，然后置于种子培养基中，25-30℃下培养20-24小时，移至产酶培养基中，25-30℃下培养21-24小时，离心并用生理盐水洗涤，获得含苯丙氨酸解氨酶的菌体；

B转化反应

将步骤A获得的含苯丙氨酸解氨酶的菌体置于转化反应液中，加入的量使反式肉桂酸与含苯丙氨酸解氨酶菌体的质量比为1∶2.5-4.0，所说的转化反应液为含¹⁵N-硫酸铵0.5-0.6mol/l、氢氧化钠1.0-1.2mol/l、反式肉桂酸质量百分含量为1.0-2.0％的溶液，25-30℃下转化反应20-24小时；

C分离纯化

将步骤B获得的转化产物混合物离心除菌后，用稀硫酸调pH至3.0-4.0，离心除沉淀，再用氢氧化钠溶液调pH至5.5-6.5，经大孔吸附树脂分离，去离子水洗脱，洗脱液用稀硫酸调pH至5.5，经旋转蒸发后，加入无水乙醇，冷却结晶，再经过滤，将晶体冷冻干燥获得¹⁵NL-苯丙氨酸；

D氮源回收

将步骤C大孔吸附树脂分离后的含¹⁵N-硫酸铵的混合溶液，与氢氧化钠溶液反应，放出的氨气用硫酸溶液收集，经蒸发和烘干获得高纯度的¹⁵N-硫酸铵。

2. 根据权利要求1的方法，其特征是：所说的含苯丙氨酸解氨酶的酵母菌株为粘红酵母Rhodotorula glutinis 2.102菌株。

3. 根据权利要求1或2的方法，其特征是：固体培养基的组份和含量为：质量百分含量1.5-2.5％的琼脂，8-12°Be麦芽浸粉，其余为水。

4.根据权利要求1或2的方法，其特征是：种子培养基的组份和质量百分含量为：葡萄糖0.5-2.0％，蛋白胨0.5-2.0％，酵母膏0.5-2.0％，K₂HPO₄0.05-0.2％，NaCl 0.4-0.6％，其余为水。

5.根据权利要求1或2的方法，其特征是：产酶培养基的组份和质量百分含量为：葡萄糖0.5-2.0％，玉米浆2.0-5.0％，豆饼粉1.0-3.0％，NaCl0.4-0.6％，K₂HPO₄ 0.05-0.2％，L-苯丙氨酸0.02-0.1％，用稀盐酸调pH至5.5，其余为水。