[发明专利]一种不同海区泥蚶的指纹鉴别方法

权利要求书

1.一种不同海区泥蚶的指纹鉴别方法，其特征在于由所述的泥蚶的消化腺组织的特异性蛋白和由所述的泥蚶的特异性的DNA序列来鉴别。

2.如权利要求1所述的一种不同海区泥蚶的指纹鉴别方法，其特征在于对所述的特异性蛋白用下述步骤进行标定：

a、取样：随机取所述的泥蚶的消化腺组织并称重；

b、提取酶液：把所述的泥蚶的消化腺组织放入玻璃匀浆器中，然后加入重量是所述的泥蚶的消化腺组织的3倍的0.05％巯基乙醇水溶液，在冰浴条件下制成匀浆液；把所述的匀浆液放入温度为4℃的冷冻离心机中，用12000rpm离心30min，取得上清液，即为酶液；

c、电泳：在所述的酶液中加入适量的溴酚兰指示剂，然后用浓度7～7.5％的聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳时间为3h～5h；

d、显色：将所述的聚丙烯酰胺凝胶置于染色液中，放在37℃恒温箱中，在所述的聚丙烯酰胺凝胶上形成显色的条带，随时观察所述的条带的显色结果，至所述的条带显色清晰为止，然后用7.5％的乙酸固定所述的条带，即为酶带。

3.如权利要求2所述的一种不同海区泥蚶的指纹鉴别方法，其特征在于所述的特异性蛋白为苹果酸脱氢酶，所述的染色液由NAD⁺16mg、NBT16mg、PMS 1.5mg、pH 7.0浓度为1M的苹果酸钠5ml、和pH 7.1浓度为0.5M的Tris-HCl溶液8ml混合配制，用蒸馏水定容至50ml。

4.如权利要求2所述的一种不同海区泥蚶的指纹鉴别方法，其特征在于所述的酶特异性蛋白为超氧化物岐化酶，所述的染色液由NBT22mg、V_B20.005g、Na₄-EDTA 12mg和pH8.0的0.05M的Tris-HCl溶液8ml混合配制，用蒸馏水定容至50ml。

5.如权利要求1所述的一种不同海区泥蚶的指纹鉴别方法，其特征在于对所述的特异性的DNA序列用下述步骤进行标定：

e、取样：从所述的泥蚶中摘取肌肉组织，剪碎所述的肌肉组织；

f、提取DNA：用常规方法从剪碎的所述的肌肉组织中提取DNA；

g、PCR反应扩增：用特异性引物对提取的所述的DNA进行PCR反应扩增，得到所述的PCR反应扩增的产物；

h、电泳：用1％～1.5％的琼酯糖凝胶对所述的PCR反应扩增的产物进行电泳10～20min，在所述的琼酯糖凝胶中加入溴化乙锭，从所述的琼酯糖凝胶中得到特异性谱带；

i、测序：在所述的特异性谱带上测定所述的泥蚶的特异性的DNA序列。

6.如权利要求5所述的一种不同海区泥蚶的指纹鉴别方法，其特征在于所述的特异性引物为

F：5’-GCTCTTCCCGCTTCACTCG-3’；

R：3’-GGGTCGATGAAGA ACGCAG-5’。