[发明专利]胶原－壳聚糖/纤维蛋白胶不对称支架及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种适应组织工程皮肤构建的多孔支架材料及其制备方法，具体得说是涉及胶原-壳聚糖/纤维蛋白胶不对称支架及其制备方法和应用。

背景技术

临床上，烧伤、创伤、糖尿病、静脉溃疡等各种原因引起的皮肤缺损是一种常见的疾病。目前常规的治疗方法便是做皮肤移植，如自体皮移植、同种异体皮或者是异种皮移植。其中自体皮移植由于没有排斥反应的问题，被作为首选的治疗方法。但是却常常存在自体皮源不足的问题，尤其是遇到大面积的烧伤病人时，这种供需矛盾更加突出。近20年来，随着材料科学和生命科学的发展，组织工程学迅速兴起。组织工程化皮肤的出现为临床上皮肤缺损的创面修复提供了一条崭新的途经。具有很大的研究前景和应用价值。但是要构建出理想的组织工程皮肤，就必须制备出一种生物相容性良好，机械性能适宜的，并具备特定微观结构的支架材料。

胶原和壳聚糖都是天然的高分子材料。作为组织工程的支架材料，胶原具有许多优越条件，它拥有最好的生物相容性，并且具有可降解、低免疫原性的特点。壳聚糖亦具有良好的生物相容性，且有促进创面愈合，抗感染的特性。这两种材料在自然界中来源广泛，成本低廉，由他们按适当比例混合后制备的支架材料可以取长补短，从而获得一种性质更加优化的支架材料。

中国发明专利申请CN02112498.1公开了一种采用天然生物材料胶原和壳聚糖为原料，通过冷冻-冻干，再进一步通过真空干热法、醛类化合物或碳化二亚胺类化合物交联，制备具有微结构可控、适宜降解速率和良好生物相容性的多孔支架。该发明的胶原/壳聚糖支架的生物相容性好，降解速率可控，且材料来源广泛，成本低，制备工艺简单可行，重复性好，所构建的支架可以广泛地应用于组织工程领域，具有良好的临床应用前景。

中国发明专利申请CN200610041912.9公开了一种制备可生物降解的组织工程用支架材料的方法。该发明提供的可生物降解组织工程用支架材料具有适宜的微观结构和空隙率，具有优良的机械强度和可控的降解速率，可广泛应用于皮肤、神经修复管、血管以及心脏瓣膜等多种组织的修复与重建。

中国发明专利申请CN200510061872.X公开了一种胶原-壳聚糖和硅橡胶双层皮肤再生支架及其制备方法。该皮肤再生支架由胶原/壳聚糖多孔支架和硅橡胶薄膜通过生物相容性良好的胶粘剂粘结而成。其中胶原/壳聚糖多孔支架可以有效诱导缺损组织处细胞的迁移、增殖和分化，原位诱导缺损真皮组织的再生；硅橡胶薄膜则起到了临时表皮层的作用，可以有效控制水分的挥发和防止细菌的侵入等，对创面起到了临时保护作用。本发明所制备的胶原-壳聚糖/硅橡胶复合支架具有良好的生物相容性，可控的降解速率和优异的创面修复能力，具有较良好的临床应用前景。

纤维蛋白胶由纤维蛋白原在凝血酶的催化下转化而来，具有良好的组织和细胞相容性，在体内可降解，临床上主要被用于手术过程中的止血剂和组织粘合剂。研究表明它具有促进细胞黏附、增值和迁移的作用，目前亦被作为一种良好的载体材料用于组织工程的创伤修复中。

现在还未有将纤维蛋白胶与胶原/壳聚糖多孔支架复合制成适应组织工程皮肤构建的多孔支架材料的相关报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种生物相容性良好，机械性能适宜，并具备特定微观结构，完全适应组织工程皮肤构建，可以有效促进皮肤创面修复愈合的胶原-壳聚糖/纤维蛋白胶不对称支架。

本发明的一个目的是提供上述的胶原-壳聚糖/纤维蛋白胶不对称支架的制备方法。

本发明的一个目的是提供上述的胶原-壳聚糖/纤维蛋白胶不对称支架的应用。

为了实现本第一个目的，本发明采用了以下的技术方案：胶原-壳聚糖/纤维蛋白胶不对称支架，该不对称支架包括胶原-壳聚糖多孔材料层和纤维蛋白胶层，纤维蛋白胶层均匀设置在胶原-壳聚糖多孔材料层的表面，两者之间形成有交界面。

作为优选方案，上述的胶原-壳聚糖多孔材料具有80～150μm的孔径结构；纤维蛋白胶具有5～20μm的微小孔径。

为了实现本第二个目的，本发明采用了以下得技术方案：

上述的胶原-壳聚糖/纤维蛋白胶不对称支架的制备方法，包括如下步骤：

1)制备得到胶原-壳聚糖多孔支架；

2)将胶原-壳聚糖多孔支架进行浸泡消毒，然后用磷酸盐缓冲液漂洗；

3)将纤维蛋白原用DMEM培养基或PBS配成浓度为4mg/ml～80mg/ml