[发明专利]溶葡萄球菌酶的制备方法和其衍生物及衍生物的制备方法

权利要求书

1.溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于包括以下的步骤：

(1)、溶葡萄球菌酶基因的设计与合成；

(2)、表达载体的构建及转化大肠杆菌工程菌：将溶葡萄球菌酶基因片段插入到表达载体质粒的酶切位点，然后直接转化大肠杆菌宿主菌，其中所述的表达载体质粒是pET系列载体质粒；

(3)、阳性克隆的筛选、培养、诱导表达：筛选出阳性克隆在培养基上进行培养，经诱导使目标蛋白表达；

(4)、表达产物的分离、纯化：将大肠杆菌工程菌菌体收集、破菌，经离心得到破菌液上清，然后对破菌液上清用层析技术纯化。

2.根据权利要求1所述的溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于溶葡萄球菌酶基因的获得是通过全基因合成或通过设计引物，再PCR获得。

3.根据权利要求2所述的溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于溶葡萄球菌酶基因序列如SEQ ID NO.1所述。

4.根据权利要求1所述的溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于pET系列载体质粒是pET-11b、pET-22b、pET-15b、pET-19b、pET-30a-c和pET-32a-c中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于步骤(3)中培养的温度控制在28℃～40℃。

6.根据权利要求1所述的溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于步骤(3)中诱导温度控制在20℃-37℃。

7.根据权利要求1所述的溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于步骤(4)中层析技术是离子交换层析、分子筛层析、疏水层析和亲和层析中的一种或多种方法。

8.聚乙二醇修饰的溶葡萄球菌酶，其特征在于由溶葡萄球菌酶与聚乙二醇采用单点或多点修饰构成。

9.根据权利要求8所述的聚乙二醇修饰溶葡萄球菌酶，其特征在于所述的聚乙二醇选自单甲氧基聚乙二醇琥珀酸基琥珀酸酯、单甲氧基聚乙二醇琥珀酸基碳酸酯和单甲氧基聚乙二醇醛中的一种或多种。

10.根据权利要求8或9所述的聚乙二醇修饰溶葡萄球菌酶，其特征在于聚乙二醇的分子量为5kDa～100kDa。

11.根据权利要求8所述的聚乙二醇修饰溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于包括如权利要求1所述的溶葡萄球菌酶的制备步骤和纯化后的溶葡萄球菌酶聚乙二醇修饰步骤。

12.根据权利要求11所述的聚乙二醇修饰溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于聚乙二醇与溶葡萄球菌酶发生共价结合反应的重量比例为0.5～20。

13.根据权利要求11或12所述的聚乙二醇修饰溶葡萄球菌酶的制备方法，其特征在于聚乙二醇与溶葡萄球菌酶发生共价结合反应的缓冲液的pH值为4～8，反应的温度为2℃～37℃，反应的时间为4～48小时。