[发明专利]溶葡萄球菌酶的制备方法和其衍生物及衍生物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及溶葡萄球菌酶的制备方法和其衍生物及衍生物的制备方法。

背景技术

葡萄球菌(Staphylococcus)是革兰氏阳性球菌的一种，广泛分布于自然界，如空气、水、土壤、饲料和一些物品上，也存在于人和动物的体表、鼻咽部及肠道，绝大多数不致病，少数可引起人和动物致病，其中金黄色葡萄球菌致病力最强，常引起皮肤、组织及器官的化脓性炎症，是烧伤创面感染、急性肝功能衰竭和血源性肾炎等疾病的主要病源菌。金黄色葡萄球菌还和G-脓毒病菌同时发生，协同作用，严重威胁患者的生命。金黄色葡萄球菌产生的肠毒素还可污染食物而导致食物中毒。医院的医师和护士中鼻腔带菌达到80～100％，而且常为耐药菌株，是医院感染的重要因素。

1940年，青霉素G的发现和使用有效的控制了金黄色葡萄球菌的感染，90％的金葡菌对青霉素敏感。1944年，英国发现了耐青霉素的金葡菌。随着β-类酰胺类抗生素在临床的广泛使用，耐药菌比例不断增加。耐药菌通过产生β-类酰胺酶分解抗生素表现出耐药性。1960年，甲氧西林研制成功，因其对青霉素酶稳定而在临床上对耐青霉素金葡菌表现出良好的治疗效果。但随着新型抗生素的使用，耐甲氧西林金葡菌(MRSA)比例不断增加，目前金黄色葡萄球菌占所有革兰氏阳性球菌感染的第一位。金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌占75％。

万古霉素是治疗MRSA的首选药物，然而1997年日本就分离出第一株对万古霉素中度耐药的金黄色葡萄球菌，万古霉素对其最小抑菌浓度为8mg/L。2002年，美国首次报道了万古霉素耐药金黄色葡萄球菌，万古霉素对其最小抑菌浓度为32mg/L。万古霉素耐药金黄色葡萄球菌的出现使细菌感染再次成为非常棘手的临床问题，2003年美国CDC制定了“VRSA/VISA检测和控制指南”，2005年NCCLS药敏试验执行标准中增加了万古霉素耐药金黄色葡萄球菌检测方法，要求各实验室开展对万古霉素耐药菌的监测。

面对金葡菌对传统抗菌药物耐药状况日益严重的情况，开发新型抗菌制剂显得尤为迫切。溶葡萄球菌酶作为葡萄球菌细胞壁裂解酶引起了人们的重视。1964年，Schindler和Schuhardt首次从一株编号为NRRL B-2628的模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans)培养物中发现并分离了溶葡萄球菌酶(Lysostaphin)。该酶为246个氨基酸组成的单链分子，分子量27kDa，锌为必须的辅助因子。氨基酸组成中缺少半胱氨酸，碱性氨基酸的比例较高，等电点在10.4～11.4之间。溶葡萄球菌酶能特异性地水解细菌细胞壁肽聚糖交联结构甘氨酸五肽桥联中第二位和第三位甘氨酸形成的肽键，因此具有破壁溶菌作用。由于甘氨酸五肽桥联结构仅大量存在于葡萄球菌细胞壁，其中又以金葡菌细胞壁分布最广，因此溶葡萄球菌酶主要对葡萄球菌尤其是金葡菌具有溶菌杀菌作用。