[发明专利]一种淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测试剂盒和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及的是，一种淡水鱼类肝吸虫 快速免疫检测试剂盒和检测方法。

背景技术

肝吸虫是一种常见人体寄生虫，通过食入含有肝吸虫囊蚴的淡水鱼类 而感染。肝吸虫成虫寄生于人体肝脏胆管内，导致肝吸虫病，引起一系列 的肝胆损害，包括胆管炎症、结石、胆汁性肝硬化，最终可以诱发肝癌。

目前对人体肝吸虫病的诊断方法很多，包括病原学方法检查粪便虫卵 和免疫学方法检测病人血清中肝吸虫抗体。病原学方法准确可靠，但虫卵 小，排卵不规律，容易漏诊，而且要采集病人粪便，用清水反复沉淀并淘 洗多次，取沉渣，之后由专业技术人员用高倍显微镜检查，过程较长，一 般需几个小时或更多，操作烦琐不便，耗费人工，难以推广普查；免疫学 方法敏感特异，方便快速，检测血清即可，因此，得到较为广泛的应用。

在免疫学方法中，酶联免疫检测技术应用最为普遍，国内在20世纪90 年代就成功开发了用于检测人体内肝吸虫的快速免疫检测试剂盒(胡绍良 等，华支睾吸虫病快速ELISA诊断试剂盒的建立，中国寄生虫病防治杂志， 1995年8卷4期，起止页码：295-296)，敏感性达到92％以上，特异性达 到98％以上。

然而，要真正切断肝吸虫流行，保障人民健康，必须从源头上对淡水 鱼肉品进行安全监督，防止含有肝吸虫囊蚴的病鱼流入市场。但目前对淡 水鱼肝吸虫检测还缺乏有效手段。传统的鱼类肝吸虫检查，是采用显微镜 对鱼肉中的肝吸虫囊蚴进行观测，但这种方法要在一般重达1000克的鱼肉 中，肉眼观察到不足1毫米的囊蚴是非常困难的，不仅效率低下，而且极 易发生遗漏。因此，显微镜检查鱼肉，查肝吸虫，除了科学研究外，几乎 没有在实际中得到应用，这也是造成淡水鱼肝吸虫缺乏安全监督的重要原 因。而淡水鱼肝吸虫免疫检测方法迄今也未建立。

因此，现有技术没有检测淡水鱼类肝吸虫的有效工具。

发明内容

本发明的目的在于提供一种淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测试剂盒和检 测方法，从而提供一种检测淡水鱼类肝吸虫的检测工具和方法。

本发明的技术方案如下：

一种淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测试剂盒，其盒体内设置酶联反应板、 酶结合物、洗涤液、底物液、显色剂、稀释液、终止液；其中，所述酶联 反应板为从肝吸虫中提取可溶性抗原并纯化，然后包被所述可溶性抗原制 得的酶联反应板；所述酶结合物为辣根过氧化酶标记抗鱼免疫球蛋白的酶 结合物。

所述的试剂盒，其中，所述酶联反应板是在通用聚苯乙烯微孔板上包 被可溶性抗原，然后在室温静置12～24小时，冷冻真空干燥后装袋封口制 成；其中，所述可溶性抗原是从感染动物中获取肝吸虫成虫，并提取得到 其可溶性抗原；包被液为含0.01％～1％可溶性抗原的缓冲液，所述缓冲液 是0.01mol/L～0.15mol/L的磷酸盐、硼酸盐或碳酸盐缓冲液，pH7.5～ pH9.5。

所述的试剂盒，其中，所述酶结合物为采用纯化的鱼免疫球蛋白免疫 动物，分离出抗鱼免疫球蛋白，经纯化后采用辣根过氧化酶进行免疫标记 制成。

所述的试剂盒，其中，所述酶结合物是含0.05％～1％的辣根过氧化物 酶标记抗鱼免疫球蛋白的0.01mol/L～0.05 mol/L磷酸盐缓冲液，pH6～8； 并且添加含量足以抑制细菌生长的防腐剂。

所述的试剂盒，其中，其还至少包括阴性对照品、阳性对照品其中之 一。

所述的试剂盒，其中，所述洗涤液为包含有0.1％～1％表面活性剂的 0.01mol/L～0.5mol/L磷酸盐缓冲液，pH6～8；底物液为0.1％～0.5％过氧化 氢溶液；显色剂为3，3’，5，5’-四甲基联苯胺；稀释液为0.01mol/L～0.5mol/L 磷酸盐缓冲液，pH6～8；终止液为1mol/L～2mol/L的硫酸或氢氧化钠。

一种用于权利要求1所述的试剂盒的检测方法，其包括步骤：

A1、从感染动物中获取肝吸虫成虫，并提取得到其可溶性抗原，在通 用聚苯乙烯微孔板上包被所述可溶性抗原，然后在室温静置12～24小时， 冷冻真空干燥后制成酶联反应板，并装袋封口保存；其中，包被液是含有 0.01％～1％所述可溶性抗原的缓冲液，所述缓冲液是pH7.5～pH9.5的0.01 mol/L～0.15mol/L的磷酸盐、硼酸盐或碳酸盐缓冲液；