[发明专利]一种生物催化制备(R)－2－羟基－4－苯基丁酸乙酯的方法

权利要求书

1.一种以2-羰基-4-苯基丁酸乙酯为底物生物催化制备(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的方法，该方法包括步骤：

(1)选择以下的选择性羰基还原酶产生菌菌株作为出发菌株：粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)AS 1.1799，博伊丁假丝酵母(Candida boidinii) AS2.2159、AS 2.2160或AS 2.2162，或赭色掷孢酵母(Sporobolomycessalmonicolor)AS 2.2110、AS 2.2111、AS 2.2113、AS 2.2114、AS 2.2115、AS 2.2116、AS 2.2117、AS 2.2118、AS 2.2119、AS 2.2120、AS2.2121、或AS2.2122；

(2)湿菌体的培养：培养基组成以g/L计为：蛋白胨10～30，葡萄糖10～30，酵母膏5～20，pH5.5～7.5，温度20～40℃，将步骤(1)所述菌株培养1～5天，发酵液过滤获得湿菌体作为酶源；

(3)配制反应体系：以2-羰基-4-苯基丁酸乙酯为底物，用0.1M、pH5.5～pH7.5的磷酸盐缓冲液配制成单一水相反应体系，底物浓度为1g/L～50g/L；或者用有机溶剂与pH6.5的磷酸盐缓冲液配制成水/有机溶剂两相体系，再加入底物，底物浓度1g/L～50g/L；或者用大孔树脂与pH5.5～pH7.5的磷酸盐缓冲液配制成水/树脂两相体系，再加入底物，底物浓度1g/L～50g/L；

(4)酶转化反应：在反应体系中加入步骤(2)所述湿菌体，于20～50℃进行酶反应，反应时间为1～48小时；

(5)转化液后处理：转化液过滤或离心分离菌体，清液以乙酸乙酯萃取，吸附树脂用乙酸乙酯洗脱，合并萃取液和洗脱液，再干燥脱水，蒸发回收溶剂，得到无色油状液体(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述菌株为博伊丁假丝酵母菌(Candida boidinii)AS 2.2159。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤(4)中加入的湿菌体量为10～60g/g底物。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述酶转化反应，在反应过程中添加葡萄糖作为辅助底物，其浓度为10～100g/L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述酶转化反应，在反应过程中补充添加底物至1～50g/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征是所用的大孔树脂为DA201、Hz816、Hz803、AB-8、D4006、HPD300、HPD100A、NAK-II、X-5、Hz004、Hz202、Hz016或Hz802大孔吸附树脂，或D201GF、D392、D315、D290、D280或D293大孔阴离子树脂，或HD-2、D61、D001、HD-1、D001-CC或D113大孔阳离子树脂，所述大孔树脂的孔径为100～180树脂与底物的质量比为0.6～6∶1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征是水/有机溶剂两相体系的配制方法是用有机溶剂与pH5.5～pH7.5的磷酸盐缓冲液，按体积比0.1∶1～1∶0.1配制成水/有机溶剂两相体系，再加入底物浓度1g/L～50g/L，所用的有机溶剂为邻苯二甲酸二辛酯，或邻苯二甲酸二丁酯、乙酸正丁酯、乙酸正戊酯、环己烷、正己烷、正庚烷、正辛烷、异辛烷、癸烷、壬烷、辛醇、正丁醇或异丁醇。

8.一种以2-羰基-4-苯基丁酸乙酯为底物生物催化制备(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的方法，该方法步骤：

(1)选择以下的选择性羰基还原酶产生菌菌株作为出发菌株：粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)AS 1.1799，博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)AS2.2159、AS 2.2160或AS 2.2162，或赭色掷孢酵母(Sporobolomycessalmonicolor)AS 2.2110、AS 2.2111、AS 2.2113、AS 2.2114、AS 2.2115、AS 2.2116、AS 2.2117、AS 2.2118、AS 2.2119、AS 2.2120、AS2.2121、或AS2.2122；

(2)湿菌体的培养：培养基组成以g/L计为：蛋白胨10～30，葡萄糖10～30，酵母膏5～20，pH5.5～7.5，温度20～40℃，将步骤(1)所述菌株培养1～5天，得到含湿菌体的发酵液；

(3)在上述湿菌体培养发酵液中加入1～50g/L的2-羰基-4-苯基丁酸乙酯作为底物；于20～50℃进行酶反应，反应时间为1～48小时；

(4)转化液后处理：转化液过滤或离心分离菌体，清液以乙酸乙酯萃取，吸附树脂用乙酸乙酯洗脱，合并萃取液和洗脱液，再干燥脱水，蒸发回收溶剂，得到无色油状液体(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯。