[发明专利]编码糖原合成起始因子的基因及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及编码糖原合成起始因子的基因及其用途，特别涉及耐干燥性及/或耐低温保存性良好的实用酵母、使用该酵母制造的酒精饮料、其制造方法等。更加具体地说，本发明涉及编码酿造酵母的具有糖原合成起始活性的蛋白质Glg1p或Glg2p的GLG1或GLG2基因，特别涉及通过提高啤酒酵母的特征基因non-ScGLG1或non-ScGLG2的表达量从而使耐干燥性及/或耐低温保存性提高的酵母、使用该酵母的酒精饮料制造方法等。此外，本发明的酵母也可应用于面包酵母、工业用酵母。

背景技术

啤酒酿造工序中具有的特征是，对发酵结束后的酵母进行回收并在下次发酵中使用(称为连续酿造)。在乙醇存在的条件下，将酵母保存在保持为0～3℃的槽内，而在此期间如果酵母死亡，不仅会影响下次发酵，而且因自溶流出的细胞构成物可能给产品带来不良气味。因此，使用耐低温保存性良好的酵母，可自由设计工序，对稳定生产高质量产品非常重要。

连续酿造的次数根据发酵条件、使用酵母的特性而不同，经过一定次数后终止。生产新使用酵母的工序称为繁殖，从小规模经过多阶段的规模放大进行放大培养，一般需要数日～数周时间，因此如果能够缩短工序时间、或使预先大量培养的菌体在低温或干燥状态下长期稳定保存，在生产效率方面将会有很大价值。

有关维持高活菌率的干燥酵母的制造方法，已经对干燥装置、温度、添加乳化剂等制造条件进行了各种研究。例如L-干燥法能够维持极高的活菌率，但另一方面，因为花费时间和成本高，在实际生产规模中使用不现实。

有关酵母的耐低温性，以面包酵母为中心，已报道了几种以提高耐冷冻性为目的的试验。这是因为与低温下能够发酵的啤酒、清酒等的酿造酵母相比较，面包酵母Saccharomyces cerevisiae的低温保存性差。例如：在日本国特开平11-155559号公报、日本国特开2003-304864号公报中，主要通过筛选法发现具有耐冷冻性及耐干燥性的面包酵母。此外，作为使用基因工程技术的例子，日本国特开平10-117771号公报中报道了破坏NTH1(海藻糖基因)的海藻糖高积累菌株，日本国特开2001-238665号公报中报道了破坏CAR1(精氨酸分解酶基因)的精氨酸等特定氨基酸高积累菌株。

发明内容

在上述状况下，期待利用编码与酿造酵母的耐干燥性及/或耐低温保存性相关的蛋白质的基因以及该蛋白质，能够高效率生产酒精饮料或有用物质。

本发明者为了解决上述课题进行了精心研究，结果从啤酒酵母中成功鉴定、分离出编码糖原合成起始因子的基因，并且确认将得到的基因导入酵母中制作使其表达的转化酵母，耐干燥性及/或耐低温保存性增强，从而完成了本发明。

本发明涉及编码啤酒酵母中存在的编码糖原合成起始因子的基因、该基因编码的蛋白质、该基因的表达受到调节的转化酵母、通过使用该基因表达受到调节的酵母从而强化酵母的耐干燥性及/或耐低温保存性的方法等。具体来说，本发明提供下述所示的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体、导入该载体的转化酵母、使用该转化酵母的酒精饮料制造方法等。

(1)多核苷酸，其为从下述(a)～(f)组成的群组中选择的多核苷酸，

(a)多核苷酸，其含有由序列号1或序列号3的碱基序列所组成的多核苷酸；

(b)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质由序列号2或序列号4的氨基酸序列所组成；

(c)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质由在序列号2或序列号4的氨基酸序列中缺失、替换、插入及/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列所组成、且具有糖原合成起始活性；

(d)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有与序列号2或序列号4的氨基酸序列有60％以上一致性的氨基酸序列、且具有糖原合成起始活性；

(e)多核苷酸，其含有在严谨条件下与由序列号1或序列号3的碱基序列的互补碱基序列所组成的多核苷酸进行杂交、且编码具有糖原合成起始活性的蛋白质的多核苷酸；以及

(f)多核苷酸，其含有：在严谨条件下与由编码序列号2或序列号4的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸的碱基序列的互补碱基序列所组成的多核苷酸进行杂交、且编码具有糖原合成起始活性的蛋白质的多核苷酸。

(2)如上述(1)所述的多核苷酸，其选自由下述(g)～(i)组成的群组，