[发明专利]一种HPV L1蛋白原核表达的高密度发酵方法

权利要求书

1.一种HPV L1蛋白原核表达的高密度发酵方法，其特征在于它包括如下步骤：

(1)种子活化：将表达HPV L1蛋白的工程菌株大肠杆菌(Escherichiacoli)CGMCC1944在固体2YT培养基上活化，然后挑单菌落到10ml YTL液体培养基上，在25-37℃下培养24-36小时；再将得到的种子液按体积比5％的接种量接种至YTL培养基中，在30-37℃下培养8-12小时；

(2)接种：向发酵罐中填充YTL培养基，然后按体积比5％-10％的接种量将上述活化好的种子液接种至液体YTL培养基；

(3)发酵：向发酵罐中通入空气或者空气/氧气的混合气，通气量4-8L/min；发酵温度25-37℃，搅拌转数200-800rpm，溶氧控制在30％-100％，pH控制在6.2-7.8，发酵时间20-30小时；当OD_600nm＝2-4时开始补料，补料的流加速度是25-400ml/h。

(4)诱导HPV L1蛋白的表达，并进行蛋白纯化，得到目的蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所用到的培养基组成为：

2YT：胰化蛋白胨16g，酵母提取物10g，NaCl 5g，H₂O 1L，硅油消泡剂0.2ml；

YTL：Na₂HPO₄.12H₂O 6-10g，KH₂PO₄ 1-3g，胰化蛋白胨7-10g，酵母提取物3-6g，65-75％的乳酸钠10-20g，MgSO₄ 0.4-0.8g，NH₄Cl 2-3g，H₂O 1L，硝酸消泡剂0.2ml，其中Na₂HPO₄.12H₂O和KH₂PO₄要溶于200mL水中，单独灭菌。

补料培养基：蛋白胨72g，酵母提取物72g，65-75％的乳酸钠100-200g，NH4Cl 10-30g，H2O 1L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中搅拌转数为400-600rpm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中pH控制在6.5-7.5。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中通入的空气/氧气的混合气中空气∶氧气＝1∶1-1∶10。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于发酵前期通入空气，发酵后期通入空气/氧气的混合气。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中补料的流加速度控制方法为：补料开始后的2-4小时控制流加速度为25ml/h，之后每2-4小时流加速度增加25ml/h-100ml/h。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(4)中诱导剂选自乳糖。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于步骤(4)中所用乳糖的浓度为10g/L-30g/L。

10.一株高效表达HPV L1蛋白的工程菌大肠杆菌(Escherichia coli)CGMCC1944。