[发明专利]检测微痕量甲基磷酸二甲酯的材料及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于检测有机磷农药的传感材料及其制备方法，特别涉及检测微痕量甲基磷酸二甲酯的材料及其制备方法。

背景技术

甲基磷酸二甲酯(DMMP)是一种有机磷农药，自20世纪80年代以来，有机磷农药成为农林生产、采后保鲜等过程中使用最广的农药种类。长期大量地使用有机磷农药，在得到效益的同时，也产生了广泛的副作用。人们日常食用的蔬菜、水果等食品中会有有机磷农药的残留，通过食物链作用，在人体累积容易致畸、致癌、致突变，还对生态环境造成严重的污染与危害。目前，在食品安全乃至人们的日常生活方面，有机磷农药残留污染已成为一个非常严重的问题。因此，实现微痕量DMMP的简便、灵敏、经济的快速检测，对食品及环境安全评价、监控有机磷农药污染等方面具有重要意义，可以切实保障人民生命安全。

在微痕量DMMP的检测材料方面，近几年国内外学者将研究重点放在了生物酶的开发和利用上。一般多选用乙/丁酰胆碱酯酶等动物性胆碱酯酶。但是动物性酯酶一般从动物血液或组织中提取，不仅取材不便，而且价格昂贵，限制其在现场快速检测方面的应用。我国也有一些学者将植物酯酶作为农残检测的酶标记物之一。如公开号为CN1279292A的“快速测定有机磷农药的植物酯酶片”专利，公开的酶片制备方法是将磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和面粉混合后，用模具在压片机上压成片，即为酶片。再如公开号为CN1366065A的“快速检测痕量有机磷和氨基甲酸酯农药的方法”专利，公开的酶的固定化方法是在缓冲液中加入牛血清白蛋白和戊二醛，再与酶液混合，加入塑料条的小孔中，待自然晾干后即可将酶固定到孔的内壁。在这两项专利中，由于用来源丰富、价廉易得的植物酯酶代替动物酯酶，大大降低了检测成本。但是由于它们都只对酶做了固定化处理，检测时除了待测样品外，还需另外加入底物和显色剂。这样不但增加了检测步骤，延长了检测时间，使用不方便。而且由于所用显色剂本身的灵敏性和检测方法的局限，其检出限较高，对含量较低的农药残留不能有效检出，而这轻微的农残可能导致慢性病，依然会威胁人们的生命安全。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测微痕量甲基磷酸二甲酯的材料及其制备方法，具有生产成本低，可以实现对微痕量DMMP实时、快速的检测，检测过程中不需要样品之外的其他试剂等特点。

本发明的目的是这样实现的：一种检测微痕量甲基磷酸二甲酯材料，由磺酸基四苯基卟啉(TPPS)和面粉组成，其组分的重量百分数为：

磺酸基四苯基卟啉(TPPS)：0.02％～0.37％

面粉：99.63％～99.98％

一种检测微痕量甲基磷酸二甲酯材料的制备方法，以市售面粉为原料，制备出植物酯酶酶液，并配制TPPS溶液，再依次将植物酯酶、TPPS固定在经戊二醛活化过的K9玻璃片上，晾干后即可得到成品。其具体的方法步骤如下：

(1)酶液的制备

以市售面粉为原料，按面粉∶蒸馏水的重量比为1∶4～6的比例，在面粉中加入蒸馏水，搅拌10～60min后，再以3000～6000r/min的离心速度，离心分离10-15min，收集上层清液，静置8～24h，就制备出植物酯酶酶液。

(2)TPPS溶液的配制

在无水乙醇溶液中加入TPPS固体粉末，搅拌充分溶解后，就制备出浓度为30.08～111.3μmol/L的TPPS溶液。

(3)K9玻璃片活化

将K9玻璃片用无水乙醇清洗表面，使其表面洁净，再将表面洁净的K9玻璃片放入戊二醛溶液中，浸泡20～120min进行活化，然后取出，再将活化后的K9玻璃片放入pH值为7.5～8.18的磷酸盐缓冲液中，备用。其磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠溶液或磷酸氢二钠-磷酸二氢钾溶液。

(4)酶的固定化

在第(1)～(3)步完成后，取出第(3)步活化后的K9玻璃片，放入第(1)步制备出的植物酯酶酶液中，浸泡80～100min，进行酶的固定化，然后取出固定化酶的K9玻璃片，再放入pH值为7.5～8.18的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠或磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液中，备用。

(5)TPPS的固定化

在第(4)步完成后，取出第(4)步固定化酶后的K9玻璃片，放入第(2)步制备出的TPPS溶液中，浸泡作用2～5min，进行TPPS固定化，取出其K9玻璃片，自然风干或将载玻片放入干燥器中干燥，就制备出检测DMMP材料的成品。

本发明采用上述技术方案后，主要有以下效果：