[发明专利]基于线粒体DNA G5351A单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒

权利要求书

1.基于线粒体DNA G5351A单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂 盒，其特征是该试剂盒包括以下分离包装的试剂：

试剂一，引物混合液100μl；上游引物和下游引物各50μl混合，浓度均 为10pmol/μl，序列如下：

上游引物HP3-F：5’-CACCATCATAGCCACCATCA-3’；

下游引物HP3-R：5’-GTTGATGCAGAGTGGGGTTT-3’；

试剂二，PCR反应混合液1000μl；成分有1×PCR buffer，2.0mMMgCl₂，200 mM dNTPs，1 U Taq酶，余量为蒸馏水；

试剂三，线粒体DNA的5351位点单核苷酸多态性G对照DNA 50μl，浓度为 50ng/μl；

试剂四，线粒体DNA的5351位点单核苷酸多态性A对照DNA 50μl，浓度为 50ng/μl；

试剂五，探针混合液120μl；三种探针各40μl混合，该三种探针浓度均 为12.5pmol/ul，三种探针序列如下：

①P3-F：

5’-P-AGGTAGAAGTAGAGGTTAAGGAGGGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’，为荧光 物FAM标记；

②P3-D1：线粒体DNA的5351位点多态性A：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGATTGAGGTGGAGTAGATTTGGCGT-3’；

③P3-D2：线粒体DNA的5351位点多态性G：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGATTGAGGTGGAGTAGATTTGGCGC-3’；

试剂六，连接反应混合液100μl；成分有pH 7.6的20mM Tris-HCl，25mM 醋酸钾，10mM醋酸镁，10mM二硫苏糖醇，1mM氧化型辅酶I，0.1％Triton X-100，0.5μl Taq DNA连接酶，余量为蒸馏水；

试剂七，电泳混合液100μl；荧光物质i×ROX和上样缓冲液6×loading buffer各为50μl。