[发明专利]基于线粒体DNA G5351A单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种疾病检测用的试剂盒，具体涉及基于线粒体DNA G5351A单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒。 

背景技术

我国是世界上高原面积最大、海拔最高、居住人口最多的国家，海拔3000m以上的高原、高山地区占国土总面积的1/6，主要分布在西藏、青海和新疆一带。上述地区是国家实施西部大开发战略的重要战场，随着青藏铁路的开通、高原地区国民经济的发展和旅游事业的兴旺，进入高原的人群必将成倍增长。但是，平原人进入高原后将面临因高原缺氧导致的急性高原病的威胁，特别是由于急性重症高原病——HAPE(high altitude pulmonary edema，HAPE)的发病率和病死率高，后果严重，更使人们对于进入高原地区心存恐惧，不敢涉足。它是一种由于高原低氧环境引起的肺水肿，起病急，进展快，如果抢救不及时，可在较短的时间内发展至呼吸衰竭，甚至死亡，是严重威胁进入高原人群健康和生命的急性重症高原病。近年的调查表明，在进入拉萨的汉族人群中，高原肺水肿的发病率高达0.4％-2％。HAPE发病的种族特异性以及家族和个体易感倾向提示，环境因素和遗传因素均可以影响HAPE的发生，而机体对环境因素的易感性也受遗传因素的影响。近年来，遗传因素在HAPE发病机制中的作用逐渐受到重视【张雪峰，高原施工人群急性重型高原病患病率调查，《高原医学杂志》，2005；  15(3)：7-8；陈有，高原肺水肿发病机制研究进展，《高原医学杂志》，2005，15(2)：62-64；高钰琪，高原肺水肿的发病机制及防治，《人民军医》，2005；482(2)：108-111】。 

由于线粒体于能量代谢密切相关，是氧传送链的生理终点站，是细胞氧耗的主要位点，是一个细胞氧易感性和适应的自然选择者，因此关于线粒体适应的研究逐渐成为热点【高文祥，低氧大鼠脑线粒体体外转录活性的研究，《中国应用生理学杂志》，2001；17：323-326 】。HAPE是一种低氧习服不良的急性高原病，因而线粒体在HAPE的发生中发生着重要的作用【Moudgil R，Hypoxicpulmonary vasoconstriction，《J Appl Physiol》，2005；98：390-403】。单核苷酸多态性(SNP)，是广泛分布于人类全基因组中稳定的多态位点，代表了不同个体之间最大的遗传差异。随着人类基因组计划的进展，人们愈来愈相信基因组中的这类多态性有助于解释个体的表型差异、不同群体和个体对疾病，特别是对复杂疾病的易感性、以及对各种药物的耐受性和对环境因子的反应。 

LDR(连接酶检测反应)是一种经济、快速的检测SNP常用的方法，其检测原理是利用高温连接酶实现对基因多态性位点的识别，高温连接酶一旦检测到DNA与互补的两条寡聚核苷酸接头对应处存在着基因点突变类型的碱基错配，则连接反应就不能进行。测序分型原理如下： 

(1)本技术方案先通过PCR(聚合酶链反应)获得含有待检测突变位点的基因片断，然后进行LDR，最后通过测序仪电泳读取检测结果； 

(2)检测结果表明，左边位点，即突变位点一为A/C杂合子，右边位点，即突变位点二为T纯合子(见图1)。 

LDR与传统的SNP分型手段相比，LDR技术有多项优势： 

(1)准确度高：与PCR等技术的假阴性假阳性相比，LDR技术可以比较准确的对SNP进行分型； 

(2)操作简单：和目前的PCR技术相似，LDR反应操作简单，对技术人员没有特殊的专业要求； 

(3)成本低：使用LDR检测系统只需现有的PCR仪等分子实验室仪器即可，无需再投入大量的资金购置设备； 

(4)通用性强：成熟的LDR检测系统适用于各种SNP位点的分型； 

(5)高通量：LDR检测系统可同时对多达上百个SNP位点进行分型，检测效率高，满足复杂疾病及药物基因组学的诊断需求。 

发明内容

本发明的目的是提供一种基于线粒体DNA G5351A单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒，能用于高原肺水肿(简称HAPE)易感者的筛选，指导HAPE的预防。