[发明专利]人CD40L表达体系及其制备方法

权利要求书

1.一种人CD40L表达体系，其特征在于该体系：

含真核启动子的表达载体；

编码SEQ ID NO：1特异性人CD40L目的基因片段；

所述表达载体在多克隆位点与CD40L目的基因片段重组。

2.根据权利要求1所述的表达体系，其特征在于所述的CD40L目的基因片段SEQID NO：1的序列是NCBI核酸数据库收录的编号为BC071754 CD40L序列中所载取的40至915间基因序列。

3.根据权利要求1所述的表达体系，其特征在于所述的表达载体含CMV和SV40真核启动子。

4.根据权利要求1所述的表达体系，其特征在于所述的表达载体在多克隆位点具有Nhe I和Kpn I酶切位点。

5.根据权利要求1，3或4所述的表达体系，其特征在于所述的表达载体为pcDNA3.1(+)载体除去多克隆位点Nhe I与Kpn I之间16个碱基的载体部分。

6.根据权利要求1所述的表达体系，其特征在于所述的CD40L目的基因片段是由人激活态T淋巴细胞中获取。

7.一种制备权利要求1所述的人CD40L表达体系的方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)CD40L目的基因的克隆；

(2)CD40L目的基因与pMD-18-T载体的重组克隆载体的构建；

(3)pMD18-T-CD40L重组克隆载体的鉴定与纯化；

(4)CD40L-表达载体的构建；

(5)CD40L-表达载体重组阳性质粒的鉴定与纯化；

(6)CD40L-表达载体重组阳性质粒转染靶细胞株；

(7)靶细胞株中CD40L目的基因表达的检测。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于CD40L目的基因的克隆引物为SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的核苷酸序列。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于所述的SEQ ID NO：2所示序列的5’末端和pMD18-T载体分别设有酶切位点Nhe I和Kpn I。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述的CD40L-表达载体中的表达载体为pcDNA3.1(+)载体除去多克隆位点Nhe I与Kpn I之间16个碱基的载体部分。