[发明专利]靶核苷酸序列的检测方法、检测靶结构及制法以及试剂盒

权利要求书

1.一种为了检测靶核苷酸序列的有用的检测靶结构的制造方法：

是包括在可获得适当延伸反应的条件下，使与位于靶核酸的5’端附近的靶核苷酸序列3’端以外的3’侧的序列互补、而且在3’末端含有不可延伸的修饰的终止核酸，与靶核酸的3’端附近的序列互补的引物，具有核苷酸延伸活性的酶和上述靶核酸反应，

通过该反应，获得含有单链核酸部分和双链核酸部分，在上述单链核酸部分中含有靶核苷酸序列，在上述双链核酸部分中至少含有除去靶核苷酸序列的区域的靶核酸和与其互补的链的检测靶结构的方法。

2.一种为了检测靶核苷酸序列的有用的检测靶结构的制造方法：

是包括在可获得适当延伸反应的条件下，使与位于第1靶核酸的3’端附近的第1靶核苷酸序列5’端以外的5’侧的序列互补的第1引物，与位于第1靶核酸互补的第2靶核苷酸序列的5’端附近的第2靶核苷酸序列的3’端以外的3’侧的序列互补、而且在3’末端含有不可延伸的修饰的终止核酸，与第2靶核酸的3’端附近的序列互补的第2引物，具有核苷酸延伸活性的酶和第1以及第2靶核酸反应，

通过该反应，获得含有单链核酸部分和双链核酸部分，在上述单链核酸部分中含有靶核苷酸序列，在上述双链核酸部分中至少含有除去靶核苷酸序列的区域的靶核酸和与其互补的链的检测靶结构的方法。

3.一种为了检测靶核苷酸序列的有用的检测靶结构的制造方法：

是包括在可获得适当延伸反应的条件下，使与位于靶核酸的3’端附近的第1靶核苷酸序列5’端以外的5’侧的序列互补的第1引物，与位于上述靶核酸的5’端附近的第2靶核苷酸序列3’端以外的3’侧的序列互补、而且在3’末端含有不可延伸的修饰的终止核酸、具有核苷酸延伸活性的酶和上述靶核酸反应，

通过该反应，获得含有单链核酸部分和双链核酸部分，在上述单链核酸部分中含有靶核苷酸序列，在上述双链核酸部分中至少含有除去靶核苷酸序列的区域的靶核酸和与其互补的链的检测靶结构的方法。

4.一种为了检测靶核苷酸序列的有用的检测靶结构的制造方法：

包括在可获得适当延伸反应的条件下，使靶核酸同第1、第2和第3引物、第1、第2和第3终止核酸、具有核苷酸延伸活性的酶反应，通过该反应，获得含有单链核酸部分和双链核酸部分，在上述单链核酸部分中含有靶核苷酸序列，在上述双链核酸部分中至少含有除去任一靶核苷酸序列的区域的靶核酸和与该靶核酸互补的链的检测靶结构，

所述靶核酸含有3’端附近的第1靶核苷酸序列、存在于第1靶核苷酸序列以外的5’侧的第2靶核苷酸序列、存在于第2靶核苷酸序列以外的5’侧的第3靶核苷酸序列、5’端附近的第4靶核苷酸序列的靶核酸，

所述第1、第2和第3引物是与靶核酸的第1靶核苷酸序列5’端以外的5’侧的序列互补的第1引物，与靶核酸的第2靶核苷酸序列的5’端以外的5’侧的序列互补的第2引物、与靶核酸的第3靶核苷酸序列的5’端以外的5’侧的序列互补的第3引物，以及

所述第1、第2和第3终止核酸是与靶核酸的第2靶核苷酸序列的3’端以外的3’侧的序列具有互补性、而且在3’末端含有不可延伸的修饰的第1的终止核酸，与靶核酸的第3靶核苷酸序列的3’端以外的3’侧的序列具有互补性、而且在3’末端含有不可延伸的修饰的第2的终止核酸，与靶核酸的第4靶核苷酸序列的3’端以外的3’侧的序列具有互补性、而且在3’末端含有不可延伸的修饰的第3的终止核酸。

5.一种检测靶核苷酸序列的方法，是具备如下工序的方法：

(1)通过使用权利要求1至4中任一项所述的方法，根据样品中的靶核酸制造检测靶结构，

(2)在可获得适当杂交的条件下，使与上述靶核苷酸序列互补的核酸探针与上述(1)制造的检测靶结构反应，

(3)通过对利用上述(2)中反应产生的杂交进行检测，检测上述靶核苷酸序列的存在。

6.用于实施权利要求1所述方法的分析试剂盒，包含，终止核酸、引物和具有核苷酸延伸活性的酶，其中

所述终止核酸与位于靶核酸的相对于3’端的3’侧的序列互补、而且在3’末端含有不可延伸的修饰，

所述引物与靶核酸的3’端附近的序列互补。