[发明专利]白木香内生真菌产物螺光黑壳菌酮A的制备方法及应用

权利要求书

1.一种化合物螺光黑壳菌酮A(SpiropreussioneA)，具有以下理化性质：

(1)形状：黄色针状结晶；

(2)熔点：153-154℃；

(3)分子量：320；

(4)分子式：C₁₉H₁₂O₅；

(5)化学结构式：

2.如权利要求1的化合物螺光黑壳菌酮A(Spiropreussione A)的制备方法：

(1)真菌AS-5的发酵培养：

将光黑壳菌(Preussia sp.)AS-5自低温保藏的斜面试管菌种活化后，转接于含PDA培养基的平皿中，于24-26℃暗培养5-10天，分别在菌落边缘打孔成菌片，并以小碎块接入液体培养基进行培养和发酵；

液体培养的培养基组成为葡萄糖、KH₂PO₄、MgSO₄、麦麸；三角瓶或其他容器振荡培养真菌；

(2)真菌AS-5发酵培养物的获得：

真菌AS-5经发酵培养后，用尼龙网过滤，分离菌丝体和发酵液，按下列方法分别处理菌丝体和发酵液部分：

①菌丝体部分用水冲洗干净，挤压除去大量水分，晾干或烘干，适当粉碎成粗颗粒；

②发酵液部分冷冻干燥得到发酵液冻干粉，或减压浓缩至小体积得到发酵液浓缩物；

(3)螺光黑壳菌酮A(Spiropreussione A)的制备：

①菌丝体粗颗粒和发酵液冻干粉，用有机溶剂提取；提取液减压浓缩至小体积，水浴除去有机溶剂，得到提取浸膏；

②发酵液浓缩物加入95％乙醇或无水乙醇进行醇沉，使混合物中含有70-80％的乙醇，震摇或剧烈搅拌后放置分层，收集上清液，沉淀部分加入95％乙醇或无水乙醇，重复以上操作1-3次，收集上清液后减压浓缩至小体积，水浴除去残留乙醇，得到提取浸膏；

③提取浸膏用蒸馏水分散，石油醚萃取；萃取液浓缩后经100-200目硅胶柱分离，流动相为石油醚至石油醚-乙酸乙酯2∶1梯度洗脱，经过重结晶纯化，得到化合物螺光黑壳菌酮A。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述的真菌为光黑壳菌(Preussia sp.)AS-5，保藏编号CGMCC No.2022。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：真菌AS-5液体培养的培养基组分按重量计为葡萄糖1-4％，KH₂PO₄ 0.1-0.5％，MgSO₄ 0.1-0.3％，麦麸1-5％煮汁，其余成分为水，培养基pH 5.0-6.5，培养容器装量30-60％，振荡转速90-130转/分钟，20-26℃暗培养4-10天收获。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于：AS-5菌丝体或发酵液的干燥、提取、浓缩的处理过程，菌丝体提取浸膏、发酵液提取浸膏或发酵液浓缩物的萃取、溶剂回收、水浴加热的处理过程，其中的处理温度不得高于70℃。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于：提取干燥菌丝体和发酵液冻干粉的有机溶剂可以是甲醇、95％乙醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯甲烷-甲醇和三氯甲烷-甲醇。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于：提取干燥菌丝体和发酵液冻干粉的方法可以是浸泡提取、超声波提取或渗漉提取。

8.如权利要求1所述的化合物螺光黑壳菌酮A在制备抗金黄色葡萄球菌和抗肿瘤细胞药物中的应用。