[发明专利]白木香内生真菌产物螺光黑壳菌酮A的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明内容属于化学和生物工程技术领域，具体的说涉及一种真菌来源的螺环化合物螺光黑壳菌酮A(Spiropreussione A)； 

本发明还涉及化合物螺光黑壳菌酮A的制备方法； 

本发明还涉及化合物螺光黑壳菌酮A在制备抗生素和抗肿瘤药物中的应用。 

背景技术

白木香[Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg](又称沉香)是瑞香科(Thymelaeaceae)白木香属(Aquilaria)多年生常绿木本植物，其含有黑色树脂的木质部入药，名为沉香。沉香具有行气止痛，温中止呕，纳气平喘的功效，临床用于治疗胸腹胀闷疼痛，呕吐呃逆，肾虚气喘。 

对中药沉香的化学成分研究表明其主要含有两种类型的化学成分：即挥发性成分和2-苯乙基色酮类。现代药理研究证明沉香中的挥发性成分，如白木香酸及沉香螺旋醇，对神经系统的药理模型活性很强；2-苯乙基色酮类具有抗过敏的活性；苄基丙酮是镇咳的有效成分，这些结果与沉香传统用药的主治功能相吻合。目前国内对白木香的研究主要集中于药理活性、化学成分、引种栽培和组织培养等方面，对其内生真菌的研究，以及内生真菌的化学成分的研究均未见有报道。 

内生真菌具有独特的生理学和生态学特点，更容易产生特殊的次生代谢产物。真菌具有生长速度快，培养条件易于实现人工控制，可以进行工业化生产的优点。对真菌的研究和开发利用对生态环境造成的影响小，不会受到自然资源的限制。这些特点使研究真菌的化学成分及次生代谢产物的生物活性成为寻找新结构的先导化合物的重要途径之一，为开发新药、保健食品等提供了重要的科学依据。自然界存在的真菌种类繁多，从这些真菌的发酵产物中寻找到结构独特，作用机理新颖的活性成分，是新药研制的基础性工作。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种化合物螺光黑壳菌酮A(Spiropreussione A)。 

本发明的另一目的在于提供一种从光黑壳菌属真菌AS-5(Preussia sp.)的液体发酵培养物中制备化合物螺光黑壳菌酮A的方法。该方法中AS-5的发酵工艺简单、生产周期短、成本低，可用于大规模发酵培养；AS-5的次生代谢产物螺光黑壳菌酮A的结构新颖，在发酵产物中的含量高，制备工艺简单。 

本发明的再一目的在于提供螺光黑壳菌酮A用于抗生素和抗肿瘤药物的研究和应用。 

用于实现本发明目的的化合物螺光黑壳菌酮A是从真菌AS-5的液体发酵物中分离得到的。真菌AS-5由多年生木本植物白木香[Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg]的茎中分离纯化得到，经培养鉴定为光黑壳菌属真菌(Preussia sp.)。该菌种于2007年4月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址：北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.2022。保藏和存活证明见附件。 

化合物螺光黑壳菌酮A具有以下理化性质： 

(1)形状：黄色针状结晶； 

(2)熔点：153-154℃； 

(3)分子量：320； 

(4)分子式：C₁₉H₁₂O₅； 

(5)化学结构式： 

制备上述化合物采用的技术方法主要包括以下步骤： 

(1)AS-5的液体发酵培养： 

将真菌AS-5自低温保藏的斜面试管菌种活化后，转接于含PDA培养基的平皿中，于24-26℃暗培养5-10天，分别在菌落边缘打孔成菌片，并以小碎块接入液体培养基进行发酵培养； 

液体培养的培养基组成为：葡萄糖1-4％，KH₂PO₄ 0.1-0.5％，MgSO₄ 0.1-0.3％，麦麸1-5％，煮汁，以上组分均按重量百分含量计算，其余成分为水，培养基pH 5.0-6.5。三角瓶或其他容器振荡培养真菌，容器装量30-60％。振荡转速90-130转/分钟，20-26℃暗培养4-10天收获。 

(2)真菌AS-5发酵培养物的获得： 

真菌AS-5经发酵培养后，用尼龙网过滤，分离菌丝体和发酵液，按下列方法分别处理菌丝体和发酵液部分： 

①菌丝体部分用清水冲洗2-3遍，挤压除去大量水分，晾干或55-65℃烘干，适当粉碎成 粗颗粒；