[发明专利]一种用于双歧杆菌发酵的复合培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于药品、食品和食品添加剂以及兽药、生物饲料、饲料添加剂生产技术领域，尤其涉及一种用于双歧杆菌发酵的复合培养基及其制备方法。

背景技术

双歧杆菌(Bifidobacterium)是人体最重要的生理性细菌，是胃肠道正常菌群中核心的优势菌群。长期和大量的研究表明，在人和豢养动物的整个生命过程中，双歧杆菌的多项生理调节功能对维持其健康状态具有至关重要的作用；换句话说，机体几乎所有的非健康状态，都直接或间接地与双歧杆菌数量和功能的平衡失调有关。正因如此，从20世纪70年代末开始，双歧杆菌制剂及其相关产品的开发及其产业化，成为健康产业链中重要的一环，在药品、保健品、食品、兽药和饲料等生产领域得到蓬勃发展，至今仍势头强劲。目前，双歧杆菌制剂及其相关产品的开发和生产主要通过发酵工程技术手段进行，主要有赖于双歧杆菌的大规模发酵培养，因此，不断开发出双歧杆菌高效、简便、廉价和安全的生产型培养基，以期提高培养效率，保证产品质量，降低生产成本，已成为双歧杆菌制剂及其相关产品的生产企业和研发机构着力追求的目标。

在现有技术中，双歧杆菌的规模培养和发酵生产仍以经典的TPY培养基或改良TPY培养基为主。实践证明，此类培养基培养双歧杆菌效果较好，细胞繁殖快，生物量较大，菌体浓度的量级一般可达10⁸cfu/mL。但目前TPY培养基存在如下问题：一是配方较复杂，质量和生产条件控制不易，原料种类多、价格高，不适宜大规模发酵时应用；二是需加入过多的无机盐类，对人体和动物健康具有潜在的有害影响；三是双歧杆菌对营养和环境条件要求苛刻，对TPY培养基的低氮源和低pH耐受性差，存活时间缩短，发酵生物量仍偏低，一般难以达到生产要求。

因此，如何开发出更为高效、经济、易控和安全的双歧杆菌发酵培养基，以适应双歧杆菌的生产和相关产业的快速发展，是研发人员面临的巨大挑战。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适合于双歧杆菌大规模、高密度培养的发酵复合培养基，以及该复合培养基的制备方法。

实现本发明目的的技术方案如下：

一种用于双歧杆菌发酵的复合培养基，由以下成分组成：

螺旋藻粉        50-150g

水苏糖          40-80g

5％猪肝浸液     30-100mL

蒸馏水补足      1000mL。

其中婴儿双歧杆菌发酵用复合培养基的适宜配方是：

螺旋藻粉        80g

水苏糖          60g

5％猪肝浸液     40mL

蒸馏水补足      1000mL。

青春双歧杆菌发酵用复合培养基的适宜配方是：

螺旋藻粉        80g

水苏糖          50g

5％猪肝浸液     50mL

蒸馏水补足      1000mL。

长双歧杆菌发酵用复合培养基的适宜配方是：

螺旋藻粉        80g

水苏糖          40g

5％猪肝浸液     60mL

蒸馏水补足      1000mL。

本发明所述双歧杆菌发酵用复合培养基的制备方法如下：

(1)制备标准螺旋藻微粉体(LVT)：

a.选择市售食品级或饲料级螺旋藻粉，平均粒径150-250μm。

b.螺旋藻粉称重后，用60目筛过筛除杂。

c.将过筛选取的螺旋藻粉，低温冻结至裂碎临界点(玻璃点)后，用气流粉碎(包括使用圆盘式气流磨、循环管式气流磨、对喷式气流磨、流化床对喷式气流磨和靶式气流磨等)的方法进行能量破碎，直至得到平均粒径为60-80μm的可溶性螺旋藻微粉体，烘干，按培养基配比量的需求分装备用。

(2)准备水苏糖：有成品市售，本发明选用食品级的可溶性水苏糖结晶。

(3)制备5％猪肝浸液：

①将5g市售猪肝浸粉，加入70-80℃加热的蒸馏水100mL中，用振荡或搅拌的方法直至肝浸粉在水中彻底溶解形成溶液，即得5％猪肝浸液。

②5％猪肝浸液也可用下述方法制得：

a.精选质量无虞的新鲜或冷冻猪肝(含水量50-60％)，称重后绞成碎末。

b.装入刻度烧瓶内，按质量∶容积为18g-20g∶100mL的配比量加入蒸馏水，升温到100℃，持续浸煮约4-6h。