[发明专利]布鲁氏菌弱毒疫苗突变株及其构建方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及疫苗突变株及其构建方法与应用，特别是涉及一种布鲁氏菌弱毒疫苗突变株及其构建方法与其在制备布鲁氏菌预防性疫苗中的应用。

背景技术

布鲁氏菌病(布病)是由布鲁氏菌引起的一种流行广泛、危害极大的人畜共患病，是《中华人民共和国传染病防治法》中记载的35种传染病中的乙类传染病，并被列为《家畜家禽防疫条例实施细则》中记载的二类传染病之首。迄今为止，该病已波及到世界五大洲，在200多个国家中已有160多个国家和地区有人畜布病的存在和流行。布病是目前世界上流行最广，危害最大的人畜共患病之一，严重地影响着人民健康和畜牧业发展。人患此病，病期可长达数月、数年，甚至十几年，严重者甚至丧失劳动能力。家畜患布病后出现流产、死胎、不孕、乳腺炎和睾丸炎等，每年因家畜布病造成的经济损失高达数十亿美元。布病在我国流行范围广、危害严重，自新中国成立后开展了全面的系统防治，因而有效地控制了布病的发生和流行。然而，自上个世纪90年代以来，该病的国内外疫情呈明显上升趋势，被列为再度肆虐的传染病，引起国内外的广泛关注。为防治动物布病，我国成功地研制出布鲁氏菌羊种M₅弱毒疫苗和猪种S₂弱毒疫苗，并进行了大面积的推广应用，对牛、羊、猪、鹿等动物布病的防制起了巨大的作用，经济效益和社会效益十分显著。此外，对人采用从国外引进的104M减毒活菌苗免疫疫区内职业人群及受威胁的高危人群，也有效地控制了布鲁氏菌的感染。但是，在布氏菌疫苗用于防治布病的过程中，还存在着自然感染和疫苗免疫难以鉴别的问题，因为人畜应用活菌苗以后所产生的各种血清反应和自然感染所产生的各种血清学反应极其相似。鉴别诊断不仅关系着布病的防治工作，同时对流行病学调查也具有重要意义，这也是布病防治领域的难题之一。

布鲁氏菌弱毒活疫苗防治人、畜间布病的主要问题是：接种后产生的抗体与自然感染产生的抗体无法鉴别，这给布病的诊断带来困难。目前，广泛应用的布鲁氏菌弱毒活疫苗包括国际通用的S19、Rev-1和104M，以及我国研制的布鲁氏菌羊种M₅弱毒疫苗和猪种S₂弱毒疫苗都存在这个问题(WHO.The Development of New/ImprovedBrucellosis Vaccines：Report of WHO Meeting，1997.)。近来，美国从强毒株2308中筛选出一种减毒的粗糙型牛种布鲁氏菌突变株活疫苗RB51，此突变株由于缺乏O-抗原不产生相应的抗体，因此不干扰常规血清学诊断，在美国已获得政府批准正式使用(WHO.The Development of New/Improved Brucellosis Vaccines：Report of WHOMeeting，1997.)。但是，最近的文献报道，RB51也产生低水平的O-抗原，意味着用RB51做疫苗仍有干扰常规血清学和ELISA诊断的可能性(Cloeckaert A，Zygmunt M S，Guilloteau L A.Brucella abortus vaccine strain RB51 produces low levels ofM-like O-antigen.Vaccine.2002，20：1820-1822.)。

bp26(GenBank号：AF242532)、wboA(与O-抗原聚合作用有关)(GenBank号：AF107768)、omp31(GenBank号：U39453，该基因的功能为：形成细胞外膜孔道的蛋白)、P39(GenBank号：AF360361，该基因的功能为：参与结合蛋白依赖的转运系统)和pgm(GenBank号：AF232056，磷酸葡萄糖变位酶，Phosphoglucomutase，与O-抗原组装有关)是来源于病原体的基因，这些基因是细菌复制非必需的，同时它们又编码免疫显性抗原。

发明内容

本发明的目的是提供免疫保护作用良好，并且能够与非突变株感染进行鉴别的布鲁氏菌弱毒疫苗突变株。

为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：布鲁氏菌弱毒疫苗突变株，是将布鲁氏菌弱毒疫苗株中编码免疫显性抗原蛋白bp26、wboA、omp31、P39或pgm的基因敲除，得到布鲁氏菌弱毒疫苗突变株。

所述布鲁氏菌弱毒疫苗株可为布鲁氏菌羊种M₅株、人用104M株或猪种S2株(上述布鲁氏菌弱毒疫苗株均可购自中国药品生物制品研究所)。