[发明专利]一种利用亚油酸异构酶生产共轭亚油酸的方法

权利要求书

1.一种利用亚油酸异构酶生产共轭亚油酸的方法，是将亚油酸和亚油酸异构酶在超临界二氧化碳中反应1至3小时，得到共轭亚油酸；所述反应的压力为25-35Mpa，反应温度为32-44℃；

所述亚油酸异构酶的产生菌为乳酸杆菌属(Lactobacillus)中的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应温度为32℃，反应压力为25Mpa，反应时间为2小时。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应温度为40℃，反应压力为35Mpa，反应时间为3小时。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应温度为44℃，反应压力为30Mpa，反应时间为1小时。

5.根据权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述亚油酸和亚油酸异构酶的配比为2-5mg亚油酸∶6.84-20.52U.

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述亚油酸和亚油酸异构酶的配比为5mg亚油酸∶13.68U。

7.根据权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述亚油酸异构酶按照包括如下步骤的方法从亚油酸异构酶产生菌的菌体中提取纯化：

1)用超高压均质法破碎亚油酸异构酶产生菌的菌体细胞，得到均质液，将该均质液进行离心，收集含有蛋白质的上清液得到粗酶液；

所述超高压均质法的均质工作压力为130-160MPa，均质阀片直径为0.05-0.15mm；

2)将步骤1)得到的粗酶液进行(NH₄)₂SO₄饱和度为40-90％的(NH₄)₂SO₄分级沉淀，收集沉淀，用磷酸钾缓冲液悬浮，得到酶液；所述磷酸钾缓冲液的摩尔浓度为0.08-0.15mol/L、pH为5.5-7.0；

3)将步骤2)得到的酶液进行离子交换层析，所述离子交换层析采用pH为5.5-7.0、摩尔浓度为0.1-0.7mol/L的NaCl溶液进行线性洗脱，收集具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液；

4)将步骤3)得到的具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液用摩尔浓度为0.08-0.15mol/L、pH为5.5-7.0的磷酸钾缓冲液进行透析脱盐；

5)将经过步骤4)透析的酶液凝胶过滤层析；所述凝胶过滤层析中采用的洗脱液为摩尔浓度为0.08-0.15mol/L、pH为5.5-7.0的磷酸钾缓冲液，得到亚油酸异构酶。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述离子交换层析中，采用pH为5.5-7.0、摩尔浓度为0.3-0.5mol/L的NaCl溶液进行线性洗脱。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述超高压均质法的均质工作压力为130MPa、均质阀片直径为0.05mm，140MPa、均质阀片直径为0.1mm，或150MPa、均质阀片直径为0.15mm；所述磷酸钾缓冲液的摩尔浓度为0.1mol/L、pH为pH6.0，0.08mol/L、pH为pH5.5，或0.15mol/L、pH为pH7.0；所述凝胶过滤层析采用的凝胶层析柱为Sephacryl 200HR；所述离子交换层析采用的层析柱为DEAE-Sepharose FastFlow层析柱；所述(NH₄)₂SO₄的饱和度为60％、80％或90％。