[发明专利]表达聚羟基脂肪酸酯的工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1、用于表达聚羟基脂肪酸酯的工程菌，是抑制或敲除产聚羟基脂肪酸酯细菌中的与脂肪酸β氧化代谢途径相关的一个或多个基因后得到的产聚羟基脂肪酸酯菌突变株。

2、根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于：所述与脂肪酸β氧化代谢途径相关的基因包括3-酮酰辅酶A硫解酶基因、3-羟基酯酰辅酶A脱氢酶基因、3-酮酰辅酶A硫解酶基因、乙酰辅酶A酰基转移酶基因和酰基辅酶A水合酶/异构酶。

3、根据权利要求1或2所述的工程菌，其特征在于：所述产聚羟基脂肪酸酯细菌为产一种或多种单体碳链长度不小于6的中长链单体羟基脂肪酸酯的菌株。

4、根据权利要求3所述的工程菌，其特征在于：所述产聚羟基脂肪酸酯细菌为Pseudomonas putida KT2442、Pseudomonas putida KT2440、Pseudomonas aeruginosaPAO1、Pseudomonas putida KCTC1639、Pseudomona sp.strain 3Y2或Aeromonashydrophila 4AK4。

5、根据权利要求4所述的工程菌，其特征在于：所述用于表达聚羟基脂肪酸酯的工程菌为P.putida KTOY06、P.putida KTOY06-1、P.putida KTOY06-2或P.aeruginosa PACSS01。

6、一种构建权利要求1所述的用于表达聚羟基脂肪酸酯的工程菌的方法，包括以下步骤：

1)构建含有一个或多个与脂肪酸β氧化代谢途径相关基因的重组自杀载体；

2)将步骤1)构建的重组自杀载体导入产聚羟基脂肪酸酯细菌，得到表达聚羟基脂肪酸酯的工程菌。

7、根据权利要求6所示的构建方法，其特征在于：所述步骤1)中用于构建含有一个或多个与脂肪酸β氧化代谢途径相关基因的重组自杀载体的出发载体为pK18mobSacB、pGMB151、pXL275、pCVD442、pMW1823、pSUP202、pJK102或pSZ36；以pK18mobSacB为出发载体，构建的含有来源于Pseudomonas putida KT2442菌株的3-羟基酯酰辅酶A脱氢酶基因及3-酮酰辅酶A硫解酶基因的重组自杀载体为pSPK11；以pK18mobSacB为出发载体，构建的含有来源于Pseudomonas putida KT2442或Pseudomonas putida KT2440菌株的3-羟基酯酰辅酶A脱氢酶基因的重组自杀载体为pSPK13；以pK18mobSacB为出发载体，构建的含有来源于Pseudomonas aeruginosa PAO1菌株的3-酮酰辅酶A硫解酶基因的重组自杀载体为pSPK15。

8、根据权利要求6所示的构建方法，其特征在于：所述步骤2)中将步骤1)构建的重组自杀载体通过转化有所述重组自杀载体的E.coli S17-1导入产聚羟基脂肪酸酯细菌；用于构建本发明产聚羟基脂肪酸酯的工程菌的出发菌株为Pseudomonasputida KT2442、Pseudomonas putida KT2440、Pseudomonas aeruginosa PAO1、Pseudomonas putida KCTC1639、Pseudomona sp.strain 3Y2或Aeromonashydrophila 4AK4。

9、根据权利要求8所示的构建方法，其特征在于：所述以Pseudomonas putidaKT2442为出发菌株，构建的敲除3-羟基酯酰辅酶A脱氢酶基因及3-酮酰辅酶A硫解酶基因的产聚羟基脂肪酸酯的工程菌为P.putida KTOY06；以Pseudomonas putidaKT2442为出发菌株，构建的敲除3-羟基酯酰辅酶A脱氢酶基因的产聚羟基脂肪酸酯的工程菌为P.putida KTOY06-1；以Pseudomonas putida KT2440为出发菌株，构建的敲除3-羟基酯酰辅酶A脱氢酶基因的产聚羟基脂肪酸酯的工程菌为P.putidaKTOY06-2；以Pseudomonas aeruginosa PAO1为出发菌株，构建的敲除3-酮酰辅酶A硫解酶基因的产聚羟基脂肪酸酯的工程菌为P.aeruginosa PACSS01。

10、一种表达聚羟基脂肪酸酯的方法，是用含有浓度5-20g/L的碳链长度为5-18的脂肪酸的发酵培养基对权利要求1-5任一项所述的用于表达聚羟基脂肪酸酯的工程菌进行发酵，得到聚羟基脂肪酸酯。