[发明专利]芸香科花椒属植物单面针的人工快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体的说，涉及芸香科花椒属植物单面针的人工快速繁殖方法。

背景技术

单面针(Zanthoxylum Dissitum Hemsl)又名蚬壳花椒、山枇杷、大叶花椒、蚌壳花椒等，属芸香科花椒属常绿攀援或蔓生木质藤本灌木。根、茎及叶均可入药，临床上有祛风活络、散瘀止痛、解毒消肿之功效，主治牙痛、腰痛、妇女月经过多，产后月经不调等症；民间用于治疗腰腿疼痛、关节疼痛、跌打损伤等症。主要分布于我国西南、广东、广西、湖南、湖北、陕西等地，在湖南省主要分布于湘西，近年来，由于中成药生产规模日趋扩大，而单面针的自然繁殖率低下，生长也较为缓慢，致使该天然资源日趋贫乏，供不应求，并逐渐威胁着相关药厂的正常生产。因此，寻求适宜的人工繁殖途径，迅速扩大单面针资源供给已势在必行。

发明内容

本发明的目的是提供一种芸香科花椒属植物单面针的人工快速繁殖方法。

为了实现本发明的目的，本发明提供了一种芸香科花椒属植物单面针的人工快速繁殖方法，包括如下步骤：将单面针离体胚经初代培养后，依次进行继代培养、壮苗及生根培养和炼苗及移栽。

所述初代培养优选以MS固体培养基培养40-60天，培养基中添加浓度为1～5mg/L的细胞分裂素和浓度为0.1～0.6mg/L的生长素，其中，所述细胞分裂素为6-BA或者KT，所述生长素为NAA或者IBA；所述细胞分裂素更优选为6-BA，浓度为1mg/L；所述生长素更优选为NAA，浓度为0.4mg/L。

所述继代培养优选以MS、WPM、B₅或White培养基，培养温度23～27℃，光强度30～40μmol·m^-2·s^-1，光照时间12h·d^-1，培养40-60天，培养基中添加浓度为0.1～5mg/L的细胞分裂素和浓度为0.01～1.0mg/L的生长素，其中，所述细胞分裂素为6-苄基腺嘌呤(6-BA)、激动素(KT)、玉米素(ZT)、氯吡苯脲(CPPU)或者噻二唑苯基脲(TDZ)，所述生长素为萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)或者吲哚丁酸(IBA)，所述继代培养更优选以MS培养基培养。

所述壮苗及生根培养优选为以壮苗培养基：MS+ZT 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L进行壮苗培养后，以1/2MS、1/2WPM、1/2B₅或1/2White培养基生根培养，培养温度23～27℃，光强度30～40μmol·m^-2·s^-1，光照时间12h·d^-1，培养30-40天，培养基中添加浓度为0.1～5mg/L的细胞分裂素和浓度为0.01～1.0mg/L的生长素，其中，所述细胞分裂素为6-BA、KT、ZT、CPPU或者TDZ，所述生长素为NAA、IAA或者IBA，更优选为以壮苗培养基：MS+ZT 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L进行壮苗培养后，以1/4MS并添加IBA 0.3mg/L和NAA 0.05mg/L生根培养。

其中在离体胚培养实验中，对培养基在自动电热压力蒸汽灭菌锅中消毒25分钟，用HgCl₂对离体胚进行消毒。

该单面针的人工快速繁殖方法，简便易行，操作可行，能有效地使单面针较野生的更快生长繁殖，从而提高单面针药材的产量，扩大来源，可满足市场上对于单面针药材的需求。

附图说明

图1是离体胚初代培养20天后的生长情况，培养基中NAA水平为0.4mg/L；

图2是离体胚初代培养20天后的生长情况，培养基中NAA水平为0.2mg/L。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1初代培养(无菌体系的建立)

1.初代培养(无菌体系的建立)

1.1材料选择：用解剖刀切破种壳，从胚囊中取出胚，然后用70％酒精进行消毒，再用0.1％氯化亚汞进行表面消毒，用无菌水漂洗3～4次，再用无菌滤纸或纱布吸干备用。

1.2培养基的制备：根据培养的配方制备MS培养基，调pH值为5.8～6.0，用50mL三角瓶分装，置于LDZX-40II型自动电热压力蒸汽灭菌锅，于1.06kg/cm²的压力下121℃消毒25分钟。(常规制备)

1.3不同激素及浓度对离体胚培养的影响