[发明专利]高甘露糖蛋白质和产生高甘露糖蛋白质的方法

权利要求书

1.一种高甘露糖葡糖脑苷脂酶(hmGCB)制剂，其中所述hmGCB制 剂的至少60％或更多的糖链具有8个或更多的甘露糖残基，或所述 hmGCB制剂的至少80％或更多的糖链具有6个或更多的甘露糖残基，并 且其中所述hmGCB制剂通过下述方法制备：

提供一种能表达葡糖脑苷脂酶(GCB)的细胞；

使所述细胞与kifunensine接触，从而防止去除远离GCB前体寡 糖的五糖核心的至少一个甘露糖残基；和

使所述细胞生产hmGCB，从而生成hmGCB制剂。

2.权利要求1的制剂，其中防止去除远离所述前体寡糖上的五糖 核心的一个或多个α1，2甘露糖残基。

3.权利要求1的制剂，其中防止去除远离所述前体寡糖上的五糖 核心的一个α1，3甘露糖残基。

4.权利要求1的制剂，其中防止去除远离所述前体寡糖上的五糖 核心的一个α1，6甘露糖残基。

5.权利要求1的制剂，其中kifunensine以0.05-20.0μg/ml 的浓度存在。

6.权利要求1的制剂，其中kifunensine以0.1-2.0μg/ml的浓 度存在。

7.权利要求1的制剂，其还包括使所述细胞接触2类加工甘露糖 苷酶抑制剂。

8.权利要求7的制剂，其中2类加工甘露糖苷酶抑制剂选自：苦 马豆素、mannostatin、6-脱氧DIM、6-脱氧-6-氟-DIM和其组合。

9.权利要求7的制剂，其中2类加工甘露糖苷酶抑制剂是苦马豆 素。

10.权利要求7的制剂，其中2类加工甘露糖苷酶抑制剂以 0.05-20.0μg/ml的浓度存在。

11.权利要求1的制剂，其中hmGCB具有至少一条含5个甘露糖 残基的糖链。

12.权利要求1的制剂，其中hmGCB具有至少一条含8个甘露糖 残基的糖链。

13.权利要求1的制剂，其中hmGCB具有至少一条含9个甘露糖 残基的糖链。

14.权利要求1的制剂，其中在hmGCB的至少2条糖链上防止去 除一个或多个远离五糖核心的甘露糖残基。

15.权利要求1的制剂，其中制剂中至少60％的hmGCB含有一条 或多条糖链，所述糖链中防止了去除一个或多个远离五糖核心的甘露 糖残基。

16.权利要求1的制剂，其中防止去除三个或更多远离五糖核心 的甘露糖残基。

17.权利要求1的制剂，其中至少30％的细胞生产具有一条或多 条糖链的hmGCB，所述糖链具有至少8个甘露糖残基。

18.权利要求17的制剂，其中至少40％的细胞生产具有一条或 多条糖链的hmGCB，所述糖链具有至少8个甘露糖残基。

19.权利要求18的制剂，其中至少60％的细胞生产具有一条或 多条糖链的hmGCB，所述糖链具有至少8个甘露糖残基。

20.权利要求1的制剂，其中hmGCB制剂的至少80％或更多的糖 链具有6个或更多的甘露糖残基。

21.权利要求1的制剂，其中所述细胞的至少一种2类加工甘露 糖苷酶被敲除。

22.权利要求1的制剂，其中所述细胞包含2类加工甘露糖苷酶 反义分子。

23.权利要求1的制剂，其中所述细胞含有一种包含GCB编码区 的外源核酸序列。

24.权利要求23的制剂，其中细胞还含有用来调节GCB编码区的 表达的外源调节序列。

25.权利要求1的制剂，其中细胞含有用来调节内源GCB编码序 列的表达的外源调节序列。