[发明专利]多色荧光复合扩增11个肺癌易感性相关SNP位点试剂盒

权利要求书

1.一种11个肺癌易感性相关SNP位点多色荧光复合扩增试剂盒，该试剂盒包括a)引物混合物，b)DNA聚合酶，c)缓冲液(含MgCl₂)，d)质控DNA，e)等位基因分型标准物混合物，其特征是：引物混合物由11条荧光标记共享引物和22条针对不同等位基因的长度特异性引物组成；分别针对11个肺癌易感性相关SNP基因位点，分别为RASSF1(Ala133Ser)，MBD4(Glu346Lys)，XPD(Lys751Gln)，XRCC1(194Trp/Arg)，ADPRT(Val762Ala)，CYP1B1(Val432Leu)，REV1(Phe257Ser)，XPC(Lys939Gln)，GSTM4(T2517C)，AXIN2(Pro50Ser)，PLOI(Thr706Ala)。

2.一种长度特异性PCR引物设计方法，其特征是：在每一个SNP基因位点侧面设计一条共享引物，并在引物5’末端选用一种荧光物质标记；针对SNP基因位点的不同等位基因，又设计了针对SNP基因座不同等位基因的两条引物，两条引物长度不同，作为特异引物。

3.根据权利要求1所述的11个肺癌易感性SNP基因位点引物序列为：RASSF1-pub-5’-F1-GAAGCCCTGGGTTCCTCAA-3’(RASSF1位点共享引物，F1荧光素标记)

RASSF1-spe1-5’-GATCTTCTGCTCAATCTCGGC-3’(RASSF1位点特异性引物1，针对C等位基因)

RASSF1-spe2-5’-TATAGATCTTCTGCTCAATCTCGGA-3’(RASSF1位点特异性引物2，针对A等位基因)

MBD4-pub-5’-F1-TTTCCTGGTTGGTGAGCAGTT-3’(MBD4位点共享引物，F1荧光素标记)

MBD4-spe1-5’-GCCAAAGACTCAGAACACACCA-3’(MBD4位点特异性引物1，针对A等位基因)

MBD4-spe2-5’-TATATCCAAAGACTCAGAACACATCG-3’(MBD4位点特异性引物2，针对G等位基因)

XPD-pub-5’-F1-CGGACATCTCCAAATTCATTCA-3’(XPD位点共享引物，F1荧光素标记)

XPD-spe1-5’-CTGAGCAATCTGCTCTATCCTGTT-3’(XPD位点特异性引物1，针对T等位基因)

XPD-spe2-5’-TATACTGAGCAATCTGCTCTATCCTATG-3’(XPD位点特异性引物2，针对G等位基因)

XRCC1-pub-5’-F1-TCCAGACAAAGATGAGGCAGAG-3’(XRCC1位点共享引物，F1荧光素标记)

XRCC1-spe1-5’-CTGGGGATGTCTTGTTGAACC-3’(XRCC1位点特异性引物1，针对G等位基因)

XRCC1-spe2-5’-TATATTGGGGATGTCTTGTTGAGCT-3’(XRCC1位点特异性引物2，针对A等位基因)

ADPRT-pub-5’-F2-CAGCAGGAGGGTTTGCCA-3’(ADPRT位点共享引物，F2荧光素标记)

ADPRT-spe1-5’-AGCAGGTTGTCAAGCATTTACG-3’(ADPRT位点特异性引物1，针对C等位基因)

ADPRT-spe2-5’-TATAAGCAGGTTGTCAAGCATTTACA-3’(ADPRT位点特异性引物2，针对T等位基因)

CYP1B1-pub-5’-F2-GAGGGACCGTCTGCCTTGTA-3’(CYP1B1位点共享引物，F2荧光素标记)

CYP1B1-sep1-5’-CCGGGTTAGGCCACTTGAG-3’(CYP1B1位点特异性引物1，针对C等位基因)

CYP1B1-sep2-5’-TATACCGGGTTAGGCCACTTTAC-3’(CYP1B1位点特异性引物2，针对G等位基因)

REV1-pub-5’-F2-AGTCAATGGCATGAACAGTTGG-3’(REV1位点共享引物，F2荧光素标记)

REV1-spe1-5’-CCTTATCCTCCTCCTGGGAAA-3’(REV1位点特异性引物1，针对T等位基因)

REV1-spe2-5’-TATACCTTATCCTCCTCCTGGGTAG-3′(REV1位点特异性引物2，针对C等位基因)

XPC-pub-5’-F2-TGATTACTAACCCTCGCCTGTG-3’(XPC位点共享引物，F2荧光素标记)

XPC-spe1-5’-GGCGCTCAGCTCACAGGTT-3’(XPC位点特异性引物1，针对A等位基因)

XPC-spe2-5’-TATAAGCGCTCAGCTCACAGTTG-3’(XPC位点特异性引物2，针对C等位基因)

GSTM4-pub-5’-F3-GGAAAGGCGTCCAAGCAGT-3’(GSTM4位点共享引物，F3荧光素标记)

GSTM4-sep1-5’-GGCCATGGTTTGTTGGACAC-3’(GSTM4位点特异性引物1，针对C等位基因)

GSTM4-sep2-5’-TATAGGCCATGGTTTGTTGGATAT-3’(GSTM4位点特异性引物2，针对T等位基因)

AXIN2-pub-5’-F4-CAGCAGCAGCTTCCGTGAG-3’(AXIN2位点共享引物，F4荧光素标记)

AXIN2-spe1-5’-CCTGGTGTTGGAAGAGACTGG-3’(AXIN2位点特异性引物1，针对C等位基因)

AXIN2-spe2-5’TATACCTGGTGTTGGAAGAGACCGA-3’(AXIN2位点特异性引物2，针对T等位基因)

PLOI-pub-5’-F4-CAGATAGCCATAAGCAAACAGTAGC-3’(PLOI位点共享引物，F4荧光素标记)

PLOI-spe1-5’-ATGTGGAAATCTGATCCGGC-3’(PLOI位点特异性引物1，针对G等位基因)

PLOI-spe2-5’-TATAATGTGGAAATCTGATCCGGT-3’(PLOI位点特异性引物2，针对A等位基因)

四种荧光素的名称分别为：

F1：蓝色荧光标记物FAM；F2：黄色荧光标记物TAMRA；F3：绿色荧光标记物JOE；F4：红色荧光标记物ROX；四种荧光标记物可以互换。