[发明专利]一种将七叶苷用于高产β－葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法

权利要求书

1.一种将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，步骤是从富含纤维素资源的地点采集土样或挑选市售的微生物菌种，进行富集培养，将七叶苷加入基本无机盐培养基中制备平板并以其对富集液微生物进行初筛，以平板背面观菌落周围的培养基颜色变为黑色为指标选取目的菌株再进行摇瓶发酵复筛，通过DNS或Somogyi方法检测酶活性，筛选得到高产β-葡萄糖苷酶的微生物菌株；其特征在于：所述富集培养是以微晶纤维素或滤纸作为唯一碳源，在20～50℃、转速160～250r/min的条件下摇床培养12～72小时；所述对富集液微生物进行初筛的方法是将富集液进行10^-1～10^-7的梯度稀释，然后分别吸取0.1～0.3mL的稀释液均匀涂布到加入了质量体积百分比为0.01～3％七叶苷的基本无机盐培养基的平板上，在20～50℃下，培养12～72小时；所述选取目的菌株摇瓶发酵复筛的方法是挑取以平板背面观菌落周围的培养基颜色变为黑色的菌落接于产酶培养基中，在温度25～45℃、转速150～250r/min的条件下摇床培养1～7天，然后测酶活。

2.如权利要求1所述将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，其特征在于：所述土样的采集原则是含有产β-葡萄糖苷酶的细菌、真菌或放线菌；所述市售的微生物菌种是指能产β-葡萄糖苷酶的细菌、真菌或放线菌。

3.如权利要求1所述将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，其特征在于：所述基本无机盐培养基的配方为：

每1000毫升蒸馏水中，以质量体积百分比浓度计，添加柠檬酸铁0.005～0.5％，蛋白胨0.5％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，琼脂0.5～4.0％。

4.如权利要求3所述将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，其特征在于：所述基本无机盐培养基的配方为：

每1000毫升蒸馏水中，以质量体积百分比浓度计，添加柠檬酸铁0.01～0.2％，蛋白胨0.5％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，琼脂1.5～3.0％。

5.如权利要求1所述将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，其特征在于：所述向基本无机盐培养基平板中加入七叶苷的量是质量体积百分比0.1％～1.0％。

6.如权利要求1所述将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，其特征在于：所述富集培养的温度是25～45℃，培养时间是24～60小时。

7.如权利要求1所述将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，其特征在于：所述对富集液中的微生物进行七叶苷平板初筛的培养温度为25～40℃，培养时间为18～48小时。

8.如权利要求1所述将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，其特征在于：所述产酶培养基的配方为：草粉2.0％，麦麸2.0％，蛋白胨0.25％，KH₂PO₄0.1％，MgSO₄0.05％，pH自然。

9.如权利要求1所述将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，其特征在于：所述选取目的菌株摇瓶发酵复筛的温度是25～40℃、转速是180～220r/min、摇床培养时间是2～5天。

10.如权利要求1所述将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，其特征在于：所述对富集液微生物进行初筛中，挑取的以平板背面观菌落周围的培养基颜色变为黑色的菌落还能移接到含七叶苷的基本无机盐斜面培养基中保存，备用或再纯化。