[发明专利]乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒

权利要求书

1.乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒，包括：总RNA提取液、逆转录反应液、逆转录酶、RNA酶抑制剂、Taq DNA聚合酶、荧光PCR定量反应液、标准品和对照品，其特征在于，逆转录反应液包括DEPC处理的灭菌双蒸水、六聚体随机引物p(dN)6、5×RT缓冲液和dNTPs。

2.权利要求1所述乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒，其特征在于，所述总RNA提取液为TRizoL总RNA提取液。

3.权利要求1-2任一所述乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒，其特征在于，所述逆转录反应液中六聚体随机引物p(dN)6为100mmol/L六聚体随机引物p(dN)6，dNTPs为12.5mmol/L dNTPs。

4.权利要求1所述乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒，其特征在于，所述荧光PCR定量反应液包括10×PCR缓冲液、引物、2mmol/L dNTPs和SYBR Green I，所述10×PCR缓冲液包括500mmol/L KCl、100mmol/L Tris-HCl、7.5mmol/L MgCl₂，所述引物包括具有SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的正向引物和具有SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的反向引物，以人的GAPDH为内参对照，其正向引物和反向引物分别具有SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列。

5.权利要求4所述乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒，其特征在于，所述Tris-HCl的PH＝9.0。

6.权利要求1所述乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒，其特征在于，所述标准品为SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

7.权利要求1所述乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒，所述对照品的阴性对照为无γ-synuclein mRNA的RNA样品，阳性对照为含有γ-synuclein mRNA的RNA样品。

8.权利要求1所述乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒的使用方法，其特征在于，包括下述步骤：

(1)样品总RNA的提取——用TRizoL总RNA提取液从待测样品中提取总RNA，将所提取的总RNA琼脂糖凝胶电泳鉴定，-70℃保存待用，

(2)逆转录反应——1μg的总RNA用于cDNA第一链的合成，引物为100mmol/L六聚体随机引物p(dN)6，

(3)SYBR Green I荧光定量PCR——10×PCR缓冲液2.5μl，2mmol/L dNTPs 2.5μl，20×SYBR Green I 1μl，12.5μmol/L的引物各0.5μl，10U/μl的Taq酶0.2μl，逆转录产物5μl，反应总体积25μl，

反应条件：94℃预变性1分钟，94℃30秒，68℃30秒，72℃30秒，共40个循环，每个循环后自动读板1次，72℃30秒处采集荧光信号，

每次检验均设阴性对照和阳性对照，标准品用灭菌双蒸水稀释为1×10²-1×10⁹拷贝/ml，根据绘制的标准曲线得到γ-synuclein及GAPDH基因表达的相对浓度，以γ-synuclein与GAPDH相对浓度的比值来反映γ-synuclein表达量。

9.权利要求1-2，4-7任一所述乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒在诊断乳腺癌中的应用。