[发明专利]乳腺癌synuclein快速诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及一种快速定量检测乳腺癌的γ-synuclein诊断试剂盒，是一种通过荧光定量RT-PCR对待测样品中的γ-synuclein进行定量检测，以期为乳腺癌早期筛查、预后和制定相应的治疗方案提供依据。

背景技术

乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤，全世界每年约有一百多万妇女患有乳腺癌，发病率有逐年上升的趋势。以往的早期乳腺癌病人多因能触及肿块，当肿块较小时，常被认为处于临床早期，实际上这并非真正意义上的早期诊断。早期诊断应是针对在临床上触及不到肿块的乳腺癌病人而言，即亚临床状态。传统的乳腺癌检测方法主要包括：X线诊断、超声显象检查、细胞学及组织学诊断等，这些方法在乳腺癌的常规检测中起了重要作用，但普遍不适用于真正意义的乳腺癌准确的早期诊断(胡铁辉，海健，黄俊辉.乳腺癌诊断新近展[J].中国医师杂志，2003，12：1722-1724)。目前乳腺癌的生物诊断技术已成为最活跃的研究领域之一。通过传统病理形态来早期诊断乳腺癌的概念已逐步发生了改变。随着分子生物学、细胞生物学和免疫学研究的进展，乳腺癌的研究由细胞病理学进入分子病理学领域，生物诊断技术成为一种很有前途的治疗手段，特别是近年来人类基因组研究取得的丰硕成果进一步推动了生物诊断技术的发展，分子病理诊断已逐步成为乳腺癌诊断的一个重要内容。

γ-synuclein是一种乳腺癌诊断的新标志基因，又称乳腺癌特异性基因1(BCSG1，breast cancer-specifiic gene1)，其表达蛋白广泛分布在神经系统的神经元突触前末稍。除神经系统外，正常乳腺组织或良性病变中BCSG1几乎不表达，而多数浸润性乳腺癌、卵巢癌等肿瘤组织中表达异常增高。BCSG1的异常表达与肿瘤细胞的生长、浸润及转移相关(JiH，Liu YE，Jia T，et al.Identification of a breast cancer-specific gene，BCSG1，by direct differential cDNA sequencing[J].Cancer Res，1997，57：759-764)。BCSG1在乳腺癌中有很高的特异性表达，而在正常乳腺组织或良性病变中几乎不表达，因此检测患者的外周血、肿瘤组织、乳腺分泌液等标本中有无γ-synuclein的表达，可以对乳腺癌的诊断(尤其是对肿瘤的良性和恶性的鉴别)和预后治疗的提供有力证据，还可以为肿瘤转移和复发情况的监测提供帮助。

目前已被众多的实验研究和临床观察所证实：当乳腺癌发展到大于1cm，在临床上可触及肿块时，往往已是全身性疾病，可存在远处微小转移灶，只是用目前的检查方法诊断多数乳腺癌是一种全身性疾病时，尚不能发现而已。因此，如何尽早快速、准确测定乳腺癌的肿瘤转移是乳腺癌治疗中面临的主要难题之一。据报道，乳腺癌必须确诊方可治疗，现有的检查方法虽然很多，但至今只有活检所得的病理结果能作为唯一肯定诊断的依据。国外已有报道，通过针吸活检组织或细胞学穿刺进行乳腺可疑病变中微量DNA或RNA的提取，并从分子水平检测基因异常，可早期发现乳腺癌。目前常用的基因检测方法有免疫组织化学(IHC)、荧光原位杂交(FISH)和酶联免疫吸附测定(ELISA)(沈坤伟，沈镇宙.乳腺癌研究进展，美国第23届圣安东尼奥国际乳腺癌大会论文综述[J].中国肿瘤，2001，10：352-353)。FISH能直接和准确地判断靶基因是否存在扩增，但较为昂贵和繁琐；免疫组织化学因其简便、快速、经济，已成为最常规的检测方法，但仍有很多缺点：首先免疫组化的判断标准不一，使靶基因蛋白表达的检测结果不一致，其次石蜡包埋和甲醛固定可能会对免疫组织化学检测结果产生一定的影响，造成假阴性。第三，采用不同公司的抗体，检测结果也不完全相同。此外，目前已有的乳腺癌试剂盒普遍存在操作繁琐，特异性和敏感性差的问题，迫切需要一种灵敏度高、速度快、特异性强的体外检测试剂盒。近年来RT-PCR技术被用于肿瘤检测，敏感性比IHC提高10～100倍，在基因表达水平分析和定量检测等方面得到广泛应用。实时荧光定量RT-PCR是在实时RT-PCR基础上发展起来的一项新技术(High-Throughput Real-Time Reverse Transcription-PCR Quantitation ofHepatitis C Virus RNA[J].J.Clin.Microbiol，1999，37：327-332)其探针特异地同目的模板结合，与其他RT-PCR技术相比，实时RT-PCR对mRNA的检测和定量能提供更多的信息，耗时更少，其准确性、灵敏性都大大提高。