[发明专利]一种微杆菌以及采用该菌种转化生产手性药物中间体的方法无效
| 申请号： | 200710118064.1 | 申请日： | 2007-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN101113423A | 公开（公告）日： | 2008-01-30 |
| 发明（设计）人： | 郑国钧;张广据;王建军;冯亮;郭晓燕;赵一飞 | 申请（专利权）人： | 北京化工大学;山东黄河龙集团有限公司;中国科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12P13/02 |
| 代理公司： | 北京思海天达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 刘萍 |
| 地址： | 100029北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 杆菌 以及 采用 菌种 转化 生产 手性 药物 中间体 方法 | ||
1.一种微杆菌Microbacterium hydrocarbonoxydans保藏号为CGMCCNo.2085。
2.一种根据权利要求1所述微杆菌的筛选，其特征在于，包括以下步骤：
将采集的环境土样用无菌水梯度稀释后涂布于平板筛选培养基，30℃有氧条件下培养4天，挑单菌落保存在斜面保存培养基上培养2天并保存于4℃冰箱；
其中平板筛选培养基组成为：Na2HPO4·12H2O 0.7％；KH2PO4 0.2％；MgSO4·7H2O 0.02％；CaCl2·2H2O 0.001％；FeSO4·7H2O 0.0007％；ZnSO40.000001％；NH4Cl 0.2％；N-乙酰苯丙氨酸0.3％；琼脂粉2％；以上含量均为质量/体积百分比，溶于去离子水，用NaOH调pH值为7.0，105kPa灭菌30min；
斜面保存培养基组成为：酵母粉0.5％；胰蛋白胨1％；NaCl 1％；N-乙酰苯丙氨酸0.3％；琼脂粉2％；以上含量均为质量/体积百分比，溶于去离子水，用NaOH调pH值为7.0，105kPa灭菌30min；
将保存菌株无菌条件下用接种环接于液体产酶培养基中，30℃条件下，摇床振荡培养48小时，将培养的菌液8000转/分钟条件下离心5分钟，收集沉淀菌体，并用磷酸盐缓冲液洗涤，得到湿菌体；其中液体产酶培养基组成为：Na2HPO4·12H2O 0.7％；KH2PO4 0.2％；MgSO4·7H2O 0.02％；CaCl2·2H2O0.001％；FeSO4·7H2O 0.0008％；N-乙酰苯丙氨酸0.3％；葡萄糖0.5％；酵母粉0.5％；以上均为质量/体积百分比，溶于去离子水，用NaOH调pH值为7.0，105kPa灭菌30min；
将湿菌体与2g/L(+/-)γ-内酰胺溶液混合，湿菌体浓度为1％质量/体积百分比，在30℃，pH7.0条件下，200转/分钟振荡12小时；以10000转/分钟离心3分钟，得到的上清液用手性HPLC检测，筛选得到(-)γ-内酰胺的产率达38％以上且ee值达77％以上的菌株进行保藏，并命名为微杆菌MicrobacteriumhydrocarbonoxydansL29-9，保藏号为：CGMCC No.2085。
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