[发明专利]一种微杆菌以及采用该菌种转化生产手性药物中间体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微杆菌及应用该菌种生产手性药物中间体(1R，4S)-2-氮杂双环-[2.2.1]-庚烷-5-烯-3-酮的方法。

背景技术

(1R，4S)-2-氮杂双环-[2.2.1]-庚烷-5-烯-3-酮是一种十分有用的药物中间体，它有两种异构体即(1R，4S)构型和(1S，4R)构型。阿巴卡韦及卡波韦等许多碳环嘌呤和嘧啶核苷酸类似物具有抗HIV效果，(1R，4S)构型的化合物是合成以上药物的原料。筛选得到可以立体选择性水解消旋2-氮杂双环-[2.2.1]-庚烷-5-烯-3-酮而得到其(1R，4S)构型化合物的产酶菌株，在制药行业有实际应用价值，特别对抗艾滋病药物的合成具有重要意义。

Steven等人1990年在《J.CHEM.SOC.CHEM.COMMUN.(16)：1120～1121.Chemoenzymic synthesis of(-)-carbovir utilizing a whole cell catalyzed resolution of2-Azabicyclo[2.2.1]hept-5-en-3-ones》一文中，利用两种不同的细菌ENZA-1(Rhedococcusequi NCIB 40231)和ENZA-20(Pseudomonas solanacearum NCIB 40249)完整细胞生物

转化水解(+/-)γ-内酰胺的研究，分别产生了两种构型的对映体。

发明内容

本发明需要解决的技术问题之一是公开一种能够转化生产(-)γ-内酰胺的细菌菌种，即一种微杆菌(Microbacterium hydrocarbonoxydans)(L29-9)，保藏号为：CGMCC No.2085。

本发明需要解决的技术问题之二是公开一种细菌的培养方法。

本发明需要解决的技术问题之三是公开一种以细菌完整细胞转化生产(-)γ-内酰胺的方法，使其高选择性水解(+)γ-内酰胺，对映体过量值达到99.5％以上，以获得高纯度的(-)γ-内酰胺。

本发明用于转化生产(-)γ-内酰胺的微生物是一种微杆菌(Microbacteriumhydrocarbonoxydans)。

该菌种具有如下的性质：

1.形态生理生化特征：

形态特征：杆菌，菌落呈浅黄色，湿润，粘稠，圆形，边缘整齐，不透明。

生理生化特征：革兰氏阳性细菌，产γ-内酰胺水解酶。

2.采用的培养基：

平板筛选培养基：Na₂HPO₄·12H₂O 0.7％；KH₂PO₄ 0.2％；MgSO₄·7H₂O 0.02％；CaCl₂·2H₂O 0.001％；FeSO₄·7H₂O 0.0007％；ZnSO₄ 0.000001％；NH₄Cl 0.2％；N-乙酰苯丙氨酸0.3％；琼脂粉2％(均为质量/体积百分比)，溶于去离子水，以NaOH调pH值为7.0，105kPa灭菌30min。

斜面保存培养基：酵母粉0.5％；胰蛋白胨1％；NaCl 1％；N-乙酰苯丙氨酸0.3％；琼脂粉2％(均为质量/体积百分比)，溶于去离子水，以NaOH调pH值为7.0，105kPa灭菌30min。液体产酶培养基：Na₂HPO₄·12H₂O 0.7％；KH₂PO₄ 0.2％；MgSO₄·7H₂O 0.02％；CaCl₂·2H₂O 0.001％；FeSO₄·7H₂O 0.0008％；N-乙酰苯丙氨酸0.3％；碳源0.5％；氮源0.5％(均为质量/体积百分比)，溶于去离子水，以NaOH调pH值为7.0，105kPa灭菌30min。液体发酵培养基：Na₂HPO₄·12H₂O 0.7％；KH₂PO₄ 0.2％；