[发明专利]一种转化烟曲霉的方法及其专用表达载体无效
| 申请号： | 200710119385.3 | 申请日： | 2007-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN101126099A | 公开（公告）日： | 2008-02-20 |
| 发明（设计）人： | 乔建军;刘伟;李若瑜 | 申请（专利权）人： | 北京大学第一医院 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/60;C12N1/15;C12R1/68 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅;任凤华 |
| 地址： | 100034*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转化 曲霉 方法 及其 专用 表达 载体 | ||
1.一种表达载体，是在Ti质粒的多克隆位点插入乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶基因得到的重组表达质粒。
2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于：所述Ti质粒为双元载体
3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于：所述双元载体为如图1所示的pDHt/sk。
4.一种转化烟曲霉的方法，是将外源DNA插入权利要求1至3中任一所述的表达载体，得到含有外源DNA的重组表达载体，将所述含有外源DNA的重组表达载体通过根癌农杆菌的介导转入乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶基因功能缺陷的烟曲霉菌株中，得到转化子。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶基因功能缺陷的烟曲霉菌株为烟曲霉AF293.1。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述根癌农杆菌的介导方法为将所述含有外源DNA的重组表达载体导入根癌农杆菌中得到重组根癌农杆菌，将该重组根癌农杆菌和所述烟曲霉菌株的孢子共培养，将所述含有外源DNA的重组表达载体导入所述烟曲霉菌株中。
7.根据权利要求4、5或6所述的方法，其特征在于：所述转化子在不含尿嘧啶和尿苷的培养基中筛选得到。
8.权利要求1至3中任一所述的表达载体在烟曲霉基因敲除中的应用。
9.含有权利要求1至3中任一所述的表达载体的转基因细胞系。
10.含有权利要求1至3中任一所述的表达载体的转基因重组菌。
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