[发明专利]神经特异性烯醇化酶化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种神经特异性烯醇化酶化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于， 所述试剂盒包括：

1)神经特异性烯醇化酶校准品；

2)神经特异性烯醇化酶单克隆抗体包被的固相载体；

3)酶标记的神经特异性烯醇化酶单克隆抗体；以及

4)标记神经特异性烯醇化酶单克隆抗体的酶所作用的化学发光底物；

其中，2)神经特异性烯醇化酶单克隆抗体包被的固相载体制备包括以下步 骤：

I)包被

采用0.05M pH值为9.6的碳酸盐缓冲液或0.046M pH值为4.6的柠檬酸 缓冲液与适当浓度的神经特异性烯醇化酶单克隆抗体混合制成包被液，并将其 负载于固相载体上；

II)用生理盐水洗涤上述固相载体；以及

III)封闭

配制封闭液，基于1000mL所述封闭液包含0.2g NaH₂PO₄·2H₂O、2.9g Na₂HPO₄·12H₂O、10g BSA和1mL Proclin300，所述封闭液的pH值为7.0～ 7.6，然后将所得封闭液负载于上述洗涤后的固相载体上。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为微孔板、 塑料珠、塑料管或磁性颗粒。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标记神经特异性烯醇 化酶单克隆抗体的酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物为1，2- 二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述1，2-二氧乙烷类衍 生物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基) 苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。

6.一种制备权利要求1所述试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)配制神经特异性烯醇化酶校准品；

2)以神经特异性烯醇化酶单克隆抗体包被固相载体；

采用0.05M pH值为9.6的碳酸盐缓冲液或0.046M pH值为4.6的柠檬酸 缓冲液与适当浓度的神经特异性烯醇化酶单克隆抗体混合制成包被液，并将其 负载于固相载体上；用生理盐水洗涤上述固相载体；配制封闭液，基于 1000mL所述封闭液包含0.2g NaH₂PO₄·2H₂O、2.9g Na₂HPO₄·12H₂O、10g BSA 和1mL Proclin300，所述封闭液的pH值为7.0～7.6，然后将所得封闭液负 载于上述洗涤后的固相载体上；

3)以酶标记神经特异性烯醇化酶单克隆抗体；

4)分装上述神经特异性烯醇化酶校准品、酶标记的神经特异性烯醇化酶单 克隆抗体和化学发光底物；以及

5)组装为成品。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述固相载体为微孔板、 塑料珠、塑料管或磁性颗粒。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述标记神经特异性烯醇化 酶单克隆抗体的酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述化学发光底物为1，2- 二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述1，2-二氧乙烷类衍生 物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯 基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。