[发明专利]神经特异性烯醇化酶化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种神经特异性烯醇 化酶化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

烯醇化酶是糖酵解过程的关键酶，它是由α、β和γ三种亚基组成的二聚体构 成的，可将其分为五种同工酶(αα、αβ、αα、ββ和γγ)。其中γ二聚体同工酶NSE(γγ， 神经特异性烯醇化酶)因最初发现存在于神经细胞及神经内分泌细胞而得名。NSE 除具酶共有的催化活性之外，还与神经及神经内分泌细胞的分化和成熟相关。近 年来，NSE作为敏感的肿瘤标志物及脑损伤时的定量指标而日益受到人们的重视。

在肿瘤标志物的化学分类中，NSE属于酶类标记物。NSE是一项检测小细胞 肺癌(SCLC)和神经母细胞瘤的重要参数。其对小细胞肺癌(SCLC)诊断的特 异性要优于CEA和TPA。NSE数值与小细胞肺癌(SCLC)的转移程度有关，且 与其治疗的反应性之间存在良好的关系。NSE对神经母细胞瘤的早期诊断、疗效 监测和预报复发也具有重要的参考价值。此外，血清或脑脊液NSE水平变化还与 脑损伤范围或疾病严重程度密切相关，是早期预测预后的重要指标。

近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学 基础理论研究及临床疾病诊断各领域。其中技术工艺成熟，具有先进性且实用性 强，易于推广的主要有：放射免疫分析、酶免疫分析、时间分辨荧光免疫分析和 化学发光免疫分析等四种。这些超微量检测技术的基本理论大体相同，但是所用 示踪剂及所发出的信号各不相同。根据大量的实验结果及临床应用资料，从实用 性、稳定性、准确性及发展前景来看，依次为：化学发光免疫分析、时间分辨荧 光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析。放射免疫分析法存在诸多缺点，如 操作复杂、测定结果不稳定、试剂保存时间短、放射性污染、仪器昂贵等。酶免 疫分析法灵敏度低，影响因素较多，易造成假阴性和假阳性。

现有技术中的化学发光免疫分析定量试剂盒为封闭式全自动化学发光测量系 统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应用 于临床诊断和科研工作。本发明是在酶联免疫分析的基础上应用酶催化发光底物， 通过检测发光底物产生的光信号代替酶联免疫分析中的显色底物，因而其灵敏度 大大提高，并且操作简便适用性广，既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪， 也可用于全自动的测量系统，可实现大批量快检测，使用成本低，更易推广应用。

发明内容

本发明的发明人致力于解决上述问题从而提出并完成了本发明。

本发明的目的之一是提供一种神经特异性烯醇化酶化学发光免疫分析定量测 定试剂盒。

本发明的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。

根据本发明的试剂盒包括：

1)神经特异性烯醇化酶校准品；

2)神经特异性烯醇化酶单克隆抗体包被的固相载体；

3)酶标记的神经特异性烯醇化酶单克隆抗体；以及

4)标记神经特异性烯醇化酶单克隆抗体的酶所作用的化学发光底物。

根据本发明的试剂盒，其中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管 或磁性颗粒。

根据本发明的试剂盒，其中，所述标记酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物 酶。

根据本发明的试剂盒，其中，所述化学发光底物为1，2-二氧乙烷类衍生 物、鲁米诺或异鲁米诺。

优选地，上述试剂盒中，所述1，2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-1，2-二 氧乙烷、3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、 CSPD或CDP-Star。

本发明提供了一种制备上述试剂盒的方法，包括以下步骤：

1)配制神经特异性烯醇化酶校准品；

2)以神经特异性烯醇化酶单克隆抗体包被固相载体；

3)以酶标记神经特异性烯醇化酶单克隆抗体；

4)分装上述神经特异性烯醇化酶校准品、酶标记的神经特异性烯醇化 酶单克隆抗体和化学发光底物；以及

5)组装为成品。

根据本发明的方法，优选，所述包被固相载体的步骤包括以下步骤：

I)包被