[发明专利]细胞角蛋白19片段化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种细胞角蛋白19片段化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

肺癌具有恶性程度高、病程发展快的特点。近年来其发病率呈上升趋势，是危害人类健康和导致人类死亡的常见肿瘤之一。肺癌可分为非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)。NSCLC是肺癌中最常见的一种，约占肺癌病例的70％～80％，各期肺癌的五年存活率只有13％。因此提高肺癌的诊断水平，对患者的及时治疗和预后监测具有重要意义。

可溶性细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragment，CYFRA21-1)是一种新的肿瘤标记物，尤其对非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer，NSCLC)的诊断有重要意义。

细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragment)中的CYFRA21-1是一种分化特异的蛋白质，是一种等电点为5.2，相对分子质量为40,000的酸性胞浆蛋白，属于细胞结构蛋白范畴，广泛存在于上皮细胞，是组成细胞骨架的蛋白质之一。由它形成的细胞体中间丝的某些片段是可溶的，并且可以用两种单克隆抗体(BM19.21和KS19.1)识别出细胞角蛋白19的21和1两个表位(抗原决定簇)。该片段即取名为可溶性细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragment，CYFRA21-1)，它在正常人血清中含量较低，在上皮源性恶性肿瘤时常有过量表达，并且由于患恶性肿瘤时激活的蛋白酶加速细胞角蛋白19的降解，使得大量CYFRA21-1产生。在上皮细胞恶性转化过程中，激活的蛋白酶加速角蛋白的降解，使得大量角蛋白片段释放人血循环，尤其是CYFRA21-1在肺癌患者血循环中含量丰富，是近年来被推广的一种新型肺癌标志物。

CYFRA21-1是细胞角蛋白19的片段，由细胞结构中主要成分细胞角蛋白19的两个单克隆抗体(BM19.21和KS19.1)组成，它是一种可溶性酸性多肽。近年来，国内外学者利用针对细胞角蛋白19片段的两种特异性单克隆抗体(BM19.21和KS19.1)建立起了多种检测各种体液或血液中细胞角蛋白19片段的特异性方法。同时测定神经特异烯醇化酶(NSE)和癌胚抗原(CEA)含量，可以显著提高肺癌诊断的特异性。

自从1959年，Yallow和Berson发明了免疫分析之后，免疫分析在临床化学领域中日益成为主要的分析工具。免疫分析可以分为以放射免疫分析(RIA)为代表的第一代免疫分析技术，以酶联免疫吸附分析(ELISA)为代表的第二代免疫分析技术，以化学发光免疫分析(CLIA)为代表的第三代免疫分析技术，以及新兴起的第四代微粒体发光免疫分析技术。

对CYFRA21-1的定量分析，目前常用的是放射免疫分析(RIA)和酶联免疫吸附分析(ELISA)，其中RIA必须用¹²⁵I等放射性元素标记，检测设备复杂，必须用专门的仪器测定，其放射性核素的半衰期短，不能长期保存，同时也给实验操作人员带来了放射性伤害。ELISA检测灵敏度不够高，检测范围窄，影响因素较多，易造成假阴性和假阳性等缺点也不能满足临床的要求，因此，化学发光免疫分析方法(CLIA)应运而生。

20世纪70年代，Arakawe首次报道利用化学发光分析超微量物质，尤其是临床分析微量的活性物质，随后化学发光在临床上的应用进入一个飞速发展的时期。化学发光免疫分析方法(CLIA)灵敏度高，可以达到10^-18mol/L；快速，发光信号在几秒钟内产生；操作简便，测试过程中不使用有害试剂。化学发光免疫分析法因标记方法的不同而分为直接标记法和化学发光酶免疫分析方法。

现有技术中的化学发光免疫分析定量试剂盒为封闭式全自动化学发光测量系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。本发明是在酶联免疫分析的基础上应用酶催化发光底物，通过检测发光底物产生的光信号代替酶联免疫分析中的显色底物，因而其灵敏度大大提高，并且操作简便适用性广，既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的测量系统，可实现大批量快检测，使用成本低，更易推广应用。

发明内容

本发明的发明人为了解决上述问题提出并完成了本发明。

本发明的目的是提供一种细胞角蛋白19片段化学发光免疫分析定量测定试剂盒。

本发明的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。