[发明专利]肿瘤相关抗原153磁微粒化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

权利要求书

1、一种肿瘤相关抗原153磁微粒化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

1)肿瘤相关抗原153校准品；

2)肿瘤相关抗原153单克隆抗体包被的磁微粒和生物素标记的肿瘤相关抗原153单克隆抗体的混合液；

3)辣根过氧化物酶标记的链亲和素；

4)上述辣根过氧化物酶所作用的化学发光底物鲁米诺或异鲁米诺；以及

5)反应管。

2、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述肿瘤相关抗原153单克隆抗体包被的磁微粒与生物素标记的肿瘤相关抗原153单克隆抗体的混合比例为1:2。

3、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物包含A液和B液，其中，

A液是0.1M pH值为8.5的Tris-HCl缓冲液，包含4.0mg/mL的鲁米诺或异鲁米诺和0.3mg/mL的对碘苯酚；

B液是0.1M pH值为4.6的柠檬酸缓冲液，包含200mg/mL的过氧化氢溶液。

4、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒使用的反应管材料为透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或者玻璃。

5、一种制备权利要求1所述试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)以肿瘤相关抗原153纯品配制校准品；

2)配制肿瘤相关抗原153单克隆抗体包被磁微粒和生物素标记肿瘤相关抗原153单克隆抗体的混合液；

3)以辣根过氧化物酶标记链亲和素；

4)配制辣根过氧化物酶所作用的化学发光底物鲁米诺或异鲁米诺；

5)分装上述校准品、抗体包被磁微粒和生物素标记抗体的混合液、酶标记物、化学发光底物鲁米诺或异鲁米诺和反应管；以及

6)组装为成品。

6、如权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述配制抗体包被磁微粒和生物素标记抗体的混合液的步骤2)中：

所述的混合液是由肿瘤相关抗原153单克隆抗体包被的磁微粒和生物素标记的肿瘤相关抗原153单克隆抗体以体积比为1:2混合，以20～40％的小牛血清配制而成；

所述磁微粒为1～2μm粒径、四氧化三铁内核、表面包裹带有活性基团的聚合物，其使用浓度为4～8mg/mL；

所述抗体包被磁微粒是通过戊二醛两步法将肿瘤相关抗原153单克隆抗体包被于磁微粒上；

以封闭液封闭包被的磁微粒，所述封闭液为含有0.2％～1.0％牛血清白蛋白、pH值为7.2的0.02mol/L磷酸缓冲液；

所述生物素标记肿瘤相关抗原153单克隆抗体是通过生物素琥珀酰亚胺酯在微碱性条件下与抗体游离赖氨酸发生偶联反应而实现的。

7、如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述活性基团为氨基或羧基。

8、如权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述以辣根过氧化物酶标记链亲和素的步骤3)中，采用改良过碘酸钠法以辣根过氧化物酶标记链亲和素。

9、如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述化学发光底物包含A液和B液，其中，

A液是0.1M pH值为8.5的Tris-HCl缓冲液，包含4.0mg/mL的鲁米诺或异鲁米诺和0.3mg/mL的对碘苯酚；

B液是0.1M pH值为4.6的柠檬酸缓冲液，包含200mg/mL的过氧化氢溶液。

10、如权利要求5所述的方法，其特征在于，使用透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或者玻璃作为反应管材料。