[发明专利]肿瘤相关抗原153磁微粒化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种肿瘤相关抗原153磁微粒化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。本发明的试剂盒结合了生物素—亲和素免疫放大技术、免疫磁微粒技术和化学发光免疫分析技术。

背景技术

癌症自从诞生之日起就对人类的生存健康构成了严重威胁。目前医院诊断早期肿瘤，主要是靠影像学和细胞病理学诊断技术，一般都是在具有明显的占位性病变和临床症状后才得以确诊。随着肿瘤早期诊断进入蛋白质时代，以血液为代表的体液蛋白质成为肿瘤标志研究领域中的热点，从而推动了快速、高灵敏、高特异肿瘤标志物新型检测技术的建立与发展。

肿瘤相关抗原153(carbonhydrate antigen 153，CA153)作为肿瘤相关抗原的一种，是一种高分子糖蛋白，平均分子量为400,000 dalton，主要用于乳腺癌的监测和筛选，以及用作评价患者预后情况的指标。乳腺癌患者体内CA153含量增高30～50％，有转移灶者增高可达80％，所以发现癌转移的敏感性比癌胚抗原和组织多肽抗原高，且早于临床发现转移。CA153与CA125联合检查，用于卵巢癌复发的早期诊断，而与CEA联合检测时，可提高乳腺癌早期诊断的敏感性和特异性。

目前用于检测CA153的免疫方法主要有酶免疫测定、放射免疫测定、免疫荧光测定、放射免疫显影、抗体芯片技术以及化学发光免疫分析。根据大量的试验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，依次为：化学发光免疫分析、荧光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析。

放射免疫分析技术因其使用放射性元素作为标记物，因此对环境有一定污染性，并存在仪器成本贵，灵敏度不高，操作复杂，测定结果不稳定，试剂保存时间短等缺点。酶免疫分析法灵敏度低，影响因素较多，易造成假阴性和假阳性。化学发光免疫分析法是一种较先进而有效的方法，可使检测灵敏度达到10^-18摩尔水平，而且检测范围可达6个数量级，其酶标记物稳定，可长期使用。化学发光免疫分析技术因其高灵敏、高特异、快速、高通量等特点得到越来越广泛的应用。

在实际的免疫检测中，从含杂质成分较多的背景中快速分离、纯化出目的待测物，一直是临床检验工作者面临的难题。免疫磁微粒技术是利用高分子材料合成微米级磁性固相微粒作载体，利用表面有机物提供的羧基活性基团与蛋白质氨基共价结合，包被上具有特异性亲合力的各种免疫活性物质(抗原或抗体)，使其致敏为免疫磁微粒，可进行抗原、抗体反应。磁微粒具有分离速度快、效率高、可重复性好；操作简单、不需要昂贵的仪器设备；不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。作为用于化学发光免疫分析检测技术的一种通用固相分离方法，磁微粒可大大提高有效包被量从而节省原料，同时可拓宽检测的线性范围，从而有效避免弯钩效应的发生。

生物素-亲和素系统具有多级的信号放大作用，并且不增加非特异性干扰，且具有灵敏度高、特异性好、稳定性高、适用性强和实验成本低等特点。待测反应体系可以利用生物素化抗体，使得亲和素-生物素系统与免疫分析检测体系偶联，放大终反应：先将针对不同抗原决定簇的固相抗体和生物素化抗体与抗原(标准抗原和待测抗原)同时反应，在固相载体表面形成双抗体夹心免疫复合物，再加入亲和素与复合物中的生物素结合，最终使反应信号放大，从而提高了免疫分析的灵敏度。

化学发光免疫分析结合生物素-亲和素系统和免疫磁微粒固相分离体系是一种检测肿瘤相关抗原153的先进而有效的方法，有助于促进化学发光免疫分析技术在临床检验、检测中的应用与发展。

发明内容

本发明同时解决了上述问题，即将生物素—亲和素免疫放大技术和免疫磁微粒技术结合化学发光免疫分析技术，检测肿瘤相关抗原153，提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测肿瘤相关抗原153的测定试剂盒，该试剂盒适于在产业上有效地推广应用。

本发明的目的是提供一种生物素—亲和素免疫放大技术和免疫磁微粒技术结合化学发光免疫分析测定肿瘤相关抗原153的磁微粒化学发光免疫分析测定试剂盒。

本发明的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。

根据本发明的试剂盒包括：1)肿瘤相关抗原153校准品；2)肿瘤相关抗原153单克隆抗体包被的磁微粒和生物素标记的肿瘤相关抗原153单克隆抗体的混合液；3)辣根过氧化物酶标记的链亲和素；4)上述辣根过氧化物酶所作用的化学发光底物鲁米诺或异鲁米诺；以及5)反应管。