[发明专利]两种酵母菌胆盐水解酶提取方法与功能性牛奶酒生产技术

说明书

技术领域

本发明涉及两种酵母菌胆盐水解酶(Bile Salt Hydrolase，BSH)的提取方法与功能性牛奶酒的生产技术，适用于发酵乳制品中功能性牛奶酒和酸牛奶酒的生产。

背景技术

益生菌(Probiotics)是指一类通过肠道定殖作用改善宿主特定部位微生态平衡并兼有若干其他有益生理功能的微生物。它们通过改善肠道微生物生态平衡，控制肠道感染，降低血清胆固醇水平，提高乳糖不耐症人对乳糖的利用，并能刺激特异性或非特异性免疫反应，具有免疫增强的作用。益生菌制品的活菌应该代谢稳定，活性较强，通过消化道后大量存活，进入肠道后发挥益生菌作用。目前用于生产益生菌剂的优良菌种有双歧杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、酵母属、克鲁维酵母属等。

早在1963年人们就证实摄取含有某种乳杆菌或者双歧杆菌发酵的酸奶具有降低血清胆固醇的含量。迄今，国内外研究者对于乳酸菌降低胆固醇的作用机理尚存在不同观点，主要集中于以下三点：(1)乳酸菌菌体细胞直接吸收同化胆固醇；(2)乳酸菌的胆盐水解酶活性使结合态胆盐降解为游离态胆盐，后者溶解度下降与胆固醇发生共同沉淀作用；(3)其他理论，如吸收同化与共沉淀联合作用。胆盐水解酶(BSH)是乳酸菌产生的代谢产物。Klaver等利用多株乳杆菌和双歧杆菌进行的降胆固醇研究证实：乳酸菌产生的胆盐水解酶能在人体肝肠循环中将结合态胆盐降解产生氨基酸与溶解度较低的游离态胆盐。后者能与胆固醇结合形成沉淀复合物而排出体外，从而降低血清总胆固醇的含量。

酵母菌包括乳糖发酵性和乳糖非发酵性二类。乳糖发酵性酵母有克鲁维酵母属(如马克斯克鲁维酵母、脆壁克鲁维酵母、乳酸克鲁维酵母、保加利亚克鲁维酵母)、假丝酵母属(如乳酒假丝酵母)和酒香酵母属等，它们能产生β-半乳糖苷酶，在乳中生长能发酵乳糖产生乙醇和CO₂，是制作乳酒的良好菌种。

有关酵母菌的益生性也有文献报道。酵母菌作为益生菌的应用起源于饲料，如Saccharomyces boulardii被用于不同类型痢疾的治疗。Psomas等(2003年)研 究了Saccharomyces boulardii具有降低胆固醇的功能。也有啤酒酵母拮抗大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌等肠道病原菌生长的报道。啤酒酵母能够通过肠道存活，进一步说明了它被作为益生菌的可能性。Subramanian等(1983年)研究了应用嗜酸乳杆菌和乳糖发酵性酵母——马克斯克鲁维酵母和Candidapseudotropicalis共生发酵生产嗜酸酵母乳产品，发现嗜酸乳杆菌的生长受酵母菌存在的刺激。利用酵母菌在生长过程中的呼吸作用，以生物法耗氧，创造一个适合于嗜酸乳杆菌生长繁殖、产酸代谢的厌氧环境。

目前，国内外尚无关于马克斯克鲁维酵母菌具有高效降低胆固醇及高产胆盐水解酶的相关文章报道和专利报道。而关于马克斯克鲁维酵母菌胆盐水解酶的提取方法及利用降胆固醇的酵母菌应用于功能性牛奶酒生产亦未见国内外文献报道和专利报道。

发明内容

本发明的第一个目的是提供两种具有高效降胆固醇及高产胆盐水解酶的酵母菌。

本发明所提供的酵母菌是：马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)K1和M3菌株。已于2006年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)。保藏号分别为：CGMCC №1812(菌株K1)，CGMCC№1811(菌株M3)。

马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)K1和M3分离筛选自吉林省白城市普通家庭的藏灵菇(又称开菲尔粒)。在含有抗生素的马铃薯乳糖(PDA)选择性培养基上马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)K1和M3菌落大小为3～4mm，表面光滑，边缘整齐，呈圆形，有光泽，微隆起，乳白色，不透明；个体形态呈卵圆形或短椭圆形(K1菌株)、长椭圆形或圆柱形(M3菌株)，不形成假菌丝；无性繁殖为多边芽殖，在马铃薯乳糖培养基中生长出芽率较高，有性繁殖形成子囊孢子；有很强的发酵能力，能产生β-半乳糖苷酶，在牛奶中发酵乳糖产乙醇量可达3.0％(m/m)以上。

上述方法得到马克斯克鲁维酵母K1和M3菌株具有高效降低胆固醇及高产胆盐水解酶属于本发明保护的范围。

本发明的第二个目的是提供两种酵母菌胆盐水解酶及其提取方法。

本发明所提供酵母菌胆盐水解酶的提取方法是由马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)K1和M3菌株得到的胆盐水解酶。