[发明专利]乳酸乳球菌和嗜热链球菌中胆盐水解酶与胞外多糖的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及乳酸乳球菌和嗜热链球菌中胆盐水解酶(Bile Salt Hydrolase，BSH)和胞外多糖(exopolysaccharide，EPS)的提取方法，适用于功能性乳制品中BSH、EPS作为功能因子及EPS作为天然稳定剂，开发生产新型的功能食品。

背景技术

益生菌(Probiotics)是指一类通过肠道定殖作用改善宿主特定部位微生态平衡并兼有若干其他有益生理功能的微生物。它们通过改善肠道微生物生态平衡，控制肠道感染，降低血清胆固醇水平，提高乳糖不耐症人对乳糖的利用，并能刺激特异性或非特异性免疫反应，具有免疫增强的作用。益生菌制品的活菌应该代谢稳定，活性较强，通过消化道后大量存活，进入肠道后发挥益生菌作用。目前用于生产益生菌剂的优良菌种有双歧杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属中的乳酸乳球菌乳酸亚种等。

早在1963年人们就证实摄取含有某种乳杆菌或者双歧杆菌发酵的酸奶具有降低血清胆固醇的含量。迄今，国内外研究者对于乳酸菌降低胆固醇的作用机理尚存在不同观点，主要集中于以下三点：(1)乳酸菌菌体细胞直接吸收同化胆固醇；(2)乳酸菌的胆盐水解酶活性使结合态胆盐降解为游离态胆盐，后者溶解度下降与胆固醇发生共同沉淀作用；(3)其他理论，如吸收同化与共沉淀联合作用。胆盐水解酶(BSH)是乳酸菌产生的代谢产物。该酶能在人体肝肠循环中将结合态胆盐降解产生氨基酸与溶解度较低的游离态胆盐。后者能与胆固醇结合形成沉淀复合物而排出体外，从而降低血清总胆固醇的含量。

有文献报道乳酸菌在亚优化生长条件下，出于对自身的保护作用，可分泌胞外多糖(EPS)。Whitfield等研究表明胞外多糖的形成有利于微生物抵抗不良环境因素，如干燥、渗透压条件、抗生素或毒物作用、巨噬细胞或噬菌体的侵袭等。自1982年日本学者Shiomi等人报道乳酸菌EPS具有抗肿瘤作用以来，引起了许多学者的注意。从报道的研究结果看，乳酸菌EPS主要有以下几个方面的功能：改善发酵乳制品组织状态，控制酸奶的脱水收缩，防止乳清析出；改善菌株对肠道黏膜的非特异性粘附，增强菌株对肠道的定殖作用；抗肿瘤作用；调节免疫系统作用；对细胞体具有保护作用；抑制肠道腐败菌的繁殖，防治结肠癌的作用。目前认为乳酸菌EPS抗肿瘤作用的机理有以下几个方面：(1)影响血液供应，鉴于细菌素能引起肿瘤细胞组织缺血性坏死，曾经设想多糖的抗肿瘤作用可能影响肿瘤的血液供应；(2)刺激某种器官或组织，分泌一种物质攻击肿瘤细胞；(3)细胞膜接触抑制作用。肿瘤细胞表面具有很强的负电荷，而有些多糖可以结合这些电荷，使细胞表面被“中和”从而有利于细胞接受信号终止分裂。

国内关于干酪乳杆菌的研究主要是其降血脂、抗高血压、治疗过敏性疾病等保健功效上，如上海光明乳业股份有限公司申请的“干酪乳杆菌Bd-II菌株及其在降低血脂方面的应用”，专利申请号为：CN03128995.9；干酪乳杆菌LC2W菌株及其在抗高血压方面的应用专利申请号为：CN03129450.2两项专利；景岳生物科技股份有限公司申请的：新的微生物株类干酪乳杆菌GM-080及其治疗过敏相关疾病的用途，专利申请号为：CN200410038566.X。

虽然国外关于干酪乳杆菌降低血清胆固醇功效的研究也有一项专利报道：Lactobacillus casei bd-II stain and used to reduce blood cholesterol(20060127380)，但是，目前国外几乎无关于乳酸乳球菌乳酸亚种、嗜热链球菌等菌株产胆盐水解酶和胞外多糖的专利报道。国内虽然有“一种干酪乳杆菌胆盐水解酶及其生产方法与专用生产菌株(200610112696.2)”、“一种双歧杆菌胞外多糖及其生产方法与专用生产菌株(200510105465.4)”、“干酪乳杆菌胞外多糖及其粗品、制备方法和应用(200510028970.3)”三项专利报道，而国内尚无乳酸乳球菌乳酸亚种、嗜热链球菌中胆盐水解酶和胞外多糖的提取方法的相关文章报道和专利报道。

发明内容

本发明的第一个目的是提供两种具有高效降胆固醇及高产胆盐水解酶和胞外多糖的乳酸菌。

本发明所提供的乳酸菌是：乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)KS4，嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)Tx，已于2006年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)。保藏号分别为：CGMCC №1807(菌株KS4)，CGMCC №1810(菌株Tx)。