[发明专利]猪用二联疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种猪用二联疫苗，其中活性成分为猪口蹄疫灭活抗原和猪呼吸与繁殖障碍综合征灭活抗原，其中两者体积比为1∶0.6-1.5。

2.如权利要求1所述的猪用二联疫苗，其中活性成分为猪口蹄疫灭活抗原和猪呼吸与繁殖障碍综合征灭活抗原，两者体积比为1∶1。

3.如权利要求1或2所述的猪用二联疫苗，其中所述二联疫苗还含有佐剂，所述佐剂为单相佐剂矿物油。

4.如权利要求3所述的猪用二联疫苗，其中所述矿物油选自法国SEPPIC公司Montanide ISA系列50V佐剂、含5％-10％的司本80和2％-5％的土温80的11号白油、含5％-10％的司本80和2％-5％的土温80的Marcol 52油。

5.如权利要求4所述的猪用二联疫苗，其中所述50V佐剂与混合的猪口蹄疫灭活抗原和猪呼吸与繁殖障碍综合征灭活抗原按1∶1体积比乳化配制，所述11号白油或Marcol 52油与混合的猪口蹄疫灭活抗原和呼吸与繁殖障碍综合征灭活抗原按1-2.0∶1体积比乳化配制。

6.一种如权利要求1所述的猪用二联疫苗的制备方法，其包括如下工艺：

转瓶培养单层细胞，转速为8-12转/小时；

单层细胞长满后接入种毒和病毒培养液，加HEPES或NaHCO₃缓冲系统调节培养液pH为7.4±0.2，病毒及培养液的接入量为300-800ml/15L瓶；

出现细胞致病作用后收集病毒液，测定病毒效价后灭活病毒；

将50V佐剂与混合的猪口蹄疫灭活抗原和猪呼吸与繁殖障碍综合征灭活抗原，按1∶1体积比乳化，11号白油或Marcol 52油与混合的猪口蹄疫灭活抗原和猪呼吸与繁殖障碍综合征灭活抗原按1-2.0∶1体积比乳化配制成猪用二联疫苗。

7.根据权利要求5所述的猪用二联疫苗的制备方法，其中种毒接入量为1～5％，其中用于培养猪口蹄疫病毒时所述病毒培养液为无血清的细胞培养液和用于培养猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒时所述病毒培养液为含血清的细胞培养液。

8.根据权利要求5所述的猪用二联灭活疫苗的制备方法，其中所述病毒培养液pH值由NaHCO₃溶液微调至设定值，其中当病毒及培养液的接入量为300-600ml/15L瓶时，培养液中加HEPES，NaOH，NaHCO₃，并用NaHCO₃溶液微调pH值。

9.根据权利要求5所述的猪用二联疫苗的制备方法，其中当猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒培养液含血清超过2％时，收获的病毒液用超滤浓缩器浓缩5-10倍，再用pH值为7.4±0.2的PBS稀释回原来体积。

10.根据权利要求5所述的猪用二联疫苗的制备方法，其中每个型的猪口蹄疫病毒其培养液接入量为300-500ml/15立升细胞培养瓶，分别培养后将其混合灭活后用于配制二联灭活疫苗。

11.根据权利要求5所述的猪用二联灭活疫苗的制备方法，其中转瓶中病毒培养液加入量为300-600ml/15L瓶时，提高转瓶转速至14±2转/小时。