[发明专利]猪用二联疫苗及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及猪用二联疫苗及其制备方法，特别是猪口蹄疫(FMD)和猪呼吸与繁殖障碍综合征(Porcine Reproductive and RespiratorySyndrome)二联灭活疫苗及其制备方法。

背景技术：

口蹄疫作为国际兽医局(OIE)规定的A类动物流行病，是国际公认的对畜牧业危害最大的动物传染病。因此，口蹄疫疫苗的研究一直受到国内外的研究人员的高度关注。猪呼吸与繁殖障碍综合征虽是国际兽医局规定的B类动物流行病，但最近一年来在我国发生了病毒变异，产生了高致病性毒株，造成大量生猪死亡，重创了我国养猪业，使猪肉价格急剧增长。因此我国政府最近高度重视该传染病，并与口蹄疫同等看待。目前正在积极开展猪呼吸与繁殖障碍综合征疫苗的研究。国外对口蹄疫灭活疫苗的生产目前主要采用悬浮培养技术培养细胞和病毒，其优点在于自动化程度高、质量稳定性较高。其缺点在于这种培养病毒的方式病毒含量低，必须经过超滤浓缩才能用于疫苗生产，这极大地限制了疫苗的产量。这种生产仅适用于疫苗储备和小量免疫需要，不适合我国对口蹄疫免疫的大量需要，并且生产设备和工艺成本很高，其产品价格使我国政府和用户都难以接受。某研究所在本领域探索了多年，并在前进口了相应的设备，力图在口蹄疫疫苗生产中使用，但最终不得不弃用，而仍使用目前的传统方法生产口蹄疫疫苗。猪呼吸与繁殖障碍综合征灭活疫苗的研究在国内外都有报道。由于猪口蹄疫和猪呼吸与繁殖障碍综合征以往在国内外很少同时造成危害，所以这两种疫苗都是单独研究、单独使用，目前国内外均没有将二者制成联苗的报道。

国内目前普遍采用传统的单层细胞培养病毒，其优点是无须国外的超滤浓缩工艺，其培养的病毒含量就可以达到制备单价疫苗的要求，适合国内的超大规模生产的要求。申请人发明的93114885.5发明专利“口蹄疫疫苗的生产工艺”，通过浓缩培养病毒使单价疫苗的效力大幅提高，目前在国内广泛应用(国家科技发明二等奖)。其缺点是其仅适合做单价疫苗，做多价联合疫苗则仍需进一步浓缩病毒，否则就只有提高使用剂量，这将加大疫苗的副反应和增加使用难度。如进一步浓缩培养来浓缩病毒，则会遇到培养基营养不足和细胞新陈代谢造成酸度增加，从而使合成出来的病毒大量降解，这不但不能达到浓缩的目的，反而使有效病毒含量越来越少。因此解决病毒培养中的营养问题和酸度问题是超浓缩培养的关键。由于猪口蹄疫疫苗和猪呼吸与繁殖障碍综合征疫苗目前使用各自不同的佐剂，前者使用双相佐剂，后者使用单相佐剂并且初步试验表明双相佐剂不适合于后者。因此寻找对二者通用的佐剂也是该二联疫苗成败的关键。

发明内容：

本发明旨在解决上述技术问题，提供一种免疫力高，成本低廉的猪口蹄疫和猪呼吸与繁殖障碍综合征二联疫苗，达到一针防两病的目的。

本发明的上述发明目的是通过如下技术方案实现的。

本发明提供一种猪用二联疫苗，其活性成分为猪口蹄疫灭活抗原和呼吸与繁殖障碍综合征灭活抗原，其中两者比例为1∶0.6-1.5(V/V)，优选为1∶1。根据疫苗毒株效价高低配比，例如口蹄疫病毒规定效价是LD₅₀≥10^7.5LD₅₀/0.2ml，猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒效价规定为TCID₅0≥10^6.5LD₅₀/ml，当口蹄疫病毒效价达到LD₅₀≥10^8.0LD₅₀/0.2ml时，而猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒效价仍为规定的最底效价TCID₅₀≥10^6.5LD₅₀/ml，则二者的配比为1∶1.5。二者反之也成立。

所述二联疫苗还含有佐剂，所述佐剂为单相佐剂为矿物油且选自法国SEPPIC公司Montanide ISA系列50V佐剂、含5％-10％的司本80和2％-5％的土温80的杭州炼油厂11号白油或含5％-10％的司本80和2％-5％的土温80的美浮公司Marcol 52油。

所述50V佐剂与混合的猪口蹄疫灭活抗原和呼吸与繁殖障碍综合征灭活抗原按1∶1体积比乳化配制，所述11号白油或Marcol 52油与混合的猪口蹄疫灭活抗原和呼吸与繁殖障碍综合征灭活抗原按1-2∶1体积比乳化配制。

本发明进一步提供一种所述的猪用二联疫苗的制备方法，其包括如下工艺：

转瓶培养单层细胞，转速为8-12转/小时；