[发明专利]一种妊娠相关血浆蛋白A的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫检测方法，尤其涉及一种妊娠相关血浆蛋白A的检测方法。

背景技术

唐氏综合征(Down syndrome，DS)是常见的严重危害胎儿的染色体病。目前，世界各国均在开展产前筛查唐氏综合征方面的研究工作。由于产前血清标志物筛查具有无创伤性，能最大限度减少羊膜腔穿刺或取绒毛所造成的创伤。近年来，最受到关注的标志物之一，就是妊娠相关血浆蛋白A(pregnancy-associated plasma protein，PAPP-A)，PAPP-A为一种灵敏度高、特异性强的血清标志物。

PAPP-A是由2个PAPP-A分子与2个嗜伊红主要碱性蛋白前体(proform ofeosinphil major basic protein，proMBP)组成的异构聚合体。PAPP-A是早孕时筛查唐氏综合征的敏感指标，单项筛查唐氏综合征的检出率可达66％，若与其他指标结合，检出率可更高。此外，PAPP-A在心血管疾病的诊断和预后方面也具有一定价值，可作为急性冠脉综合征的血清标记物，并可作为怀疑心肌梗死而肌钙蛋白阴性患者发生心肌缺血事件及血运重建的预测标记物。

大分子蛋白抗原的酶联免疫检测方法，常选择针对同一抗原上不同抗原定簇的两株单抗，一株用于捕获标本中的抗原成分，一株用作标记抗体，通过双抗体夹心法的原理检测抗原成分。在检测PAPP-A的方法中，此种检测方法作为抗体反应的两个抗原位点空间距离较近，而针对给两个抗原位点的两珠抗体均为大分子蛋白，在抗原抗体反应时，会产生空间位阻效应，不同程度地影响检测方法特异性及灵敏性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种妊娠相关血浆蛋白A的检测方法，在抗原抗体反应时，由于产生的空间位阻效应小，可提高检测方法的特异性及灵敏性。

为解决上述技术问题，本发明提供一种妊娠相关血浆蛋白A的检测方法，检测标本中妊娠相关血浆蛋白A以PAPP-A/proMBP复合物的形式存在，通过针对不同抗原的两株抗体检测PAPP-A抗原分子，一株为作为捕获抗体的PAPP-A特异性抗体，所述PAPP-A特异性抗体包被固相载，结合标本中的PAPP-A抗原分子；一株为使用抗嗜伊红主要碱性蛋白前体抗体作为检测抗体，用于结合标记物，经底物显色进行定量测定。

与现有技术相比较，本发明妊娠相关血浆蛋白A的检测方法采用配对抗体的方法，以PAPP-A作为抗原分子，采用抗PAPP-A特异性抗体作为捕获抗体，采用抗嗜伊红主要碱性蛋白前体作为检测体。由于与该配对抗体反应的两个抗原位点空间距离较远，可以最大程度地减少空间位阻效应，进而提高检测方法的特异性及灵敏性。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下通过实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

下面为本发明妊娠相关血浆蛋白A的检测方法的一较佳实施例，已知人体血液中，PAPP-A以PAPP-A/proMBP复合物的形式存在。根据PAPP-A的这种生物特性，针对不同抗原的两株抗体检测PAPP-A抗原分子，一株是PAPP-A特异性抗体，作为捕获抗体，用于包被固相载，结合标本中的抗原成分；另一株使用抗嗜伊红主要碱性蛋白前体(ProMBP)抗体作为检测抗体，检测抗体可以标记酶、荧光素、放射性核素、化学发光物等，根据不同的标记物，使用其配套仪器定量检测标本中的PAPP-A含量。

上述妊娠相关血浆蛋白A的检测方法引入了抗嗜伊红主要碱性蛋白前体，proMBP抗体与一株抗PAPP-A特异抗体配对以检测血液标本中的妊娠相关血浆蛋白A。标本中的妊娠相关血浆蛋白A以PAPP-A/proMBP复合物的形式存在，通过针对该复合物两个不同抗原的两株抗体检测PAPP-A抗原分子，一株抗PAPP-A特异性抗体作为捕获抗体，所述抗PAPP-A特异性抗体用于包被固相载体，结合标本中的PAPP-A抗原分子；一株使用抗嗜伊红主要碱性蛋白前体抗体作为检测抗体，所述检测抗体标记上标记物。

上述采用配对抗体的方法，由于与该配对抗体反应的两个抗原位点空间距离较远，可以最大程度地减少空间位阻效应，进而提高检测方法的特异性及灵敏性。