[发明专利]胃癌的淋巴结转移的检测

说明书

背景技术

全球每年约有876,000新发胃癌病例(Shibuya，Mathers等人，2002)。在美国，2005年胃癌的估计新发病例和死亡人数分别为21,860和11,550(Jemal，Murray等人，2005)。胃部恶性肿瘤是胃癌的最常见类型(90％至95％)，按照发病率次序其紧随淋巴瘤、类癌瘤和间质梭形细胞瘤之后(Kumar，Cotran等人2003)。

彻底的局部区域控制是挽救胃癌患者的主要治疗方法，其包括胃全切除术或胃次全切除术、标记淋巴结清除术、扩展淋巴结清除术和受转移影响的邻近组织切除例如脾切除术和胰腺切除术(Hartgrink和van de Velde 2005；Kitagawa，Fujii等人，2005)。在手术治疗后遭受复发的所有患者中，高达87.5％的是由局部复发或剩余局部淋巴结转移引起的(Songun，Bonenkamp等人，1996)。

在一项涵盖148个胃-食管连接部(GEJ)癌患者的调查研究中，人们得出的结论是局部淋巴结内微转移的存在是预后不良的关键指示(Heeren，Kelder等人，2005)。目前胃癌的淋巴结转移的普遍分期/诊断是通过触诊和手术中冰冻切片检查实现的。淋巴结的冰冻切片检查可以显示74％的灵敏度(Kitagawa，Fujii等人，2005)。

利用适当的基因标记物，基因表达分析和检测技术例如逆转录酶PCR(RT-PCR)或定量PCR可以提供一种可选择的用于胃癌的诊断或预后的方法。这些方法有可能提供更好的用于转移检测试验的灵敏度和精确度。先前报道的基因标记物包括CK19(Matsuda，Kitagawa等人，2004)、癌胚抗原(CAE)、细胞角蛋白-20(CK-20)、和MAGE-3(Okada，Fujiwara等人，2001)、CK18、MUC1、hTRT(Ajisaka和Miwa，2003)。不幸的是，如同公布的数据显示的，它们中的大部分在检测的所有肿瘤组织和肿瘤细胞系内不能一致表达。利用逆转录酶PCR不能在组织学检查确认的15％(CEA)到70％以上(MAGE-3)的具有胃癌转移的淋巴结中检测到标记物(Okada，Fujiwara等人，2001)。CK-20被用作标记物用于胰腺、结肠、胃、和肺癌的血液内播散的癌细胞的逆转录酶PCR检测(Chausovsky，Luchansky等人，1999，Chen，Chen等人，2004)。

在这里，鉴定了一种标记物组合其以可轻易检测的水平在具有胃癌转移的淋巴结内一致表达，这种可检测的水平在正常的淋巴结内可与其背景表达区分开来。这种标记物组合可用于检测来自胃癌、或类似细胞来源的癌，例如食道癌、胰腺癌和肠癌的播散性癌细胞。

发明内容

在本发明的一方面中，组合使用一组标记物以检测来自胃癌的淋巴结转移。在具有胃癌转移的淋巴结中，这些标记物的表达水平显著高于正常淋巴结的表达水平。标记物组合为CK19、CEA和MUC-2标记物。

在本发明的另一方面中，诊断胃癌的淋巴结转移包括从患者中获取生物学样品并测定选自标记物组的基因表达水平，其中超过预定临界水平的基因表达水平则表明胃癌转移。优选地，生物学样品为淋巴结样品。

在本发明的另一方面中，标记物被组合用于检测胃癌的淋巴结转移的方法中。

仍然在本发明的另一方面中，在手术中分析标记物。可以通过一种方法进行手术中分析，该方法包括如下步骤：制备从胃引出的淋巴结的RNA；实施针对一个或多个标记物的定量RT-PCR方法并确定出现的标记物是否超出预定截断值。

本发明包括用于实施这里提供的方法的微阵列或基因芯片，还有进行该分析的试剂盒和制品。

该说明书中所描述和要求保护的发明方法、组分、制品、和试剂盒包括标记物的组合。整个说明书中所使用的“标记物”是指：

a)基因和基因表达产物，例如mRNA和相应cDNA、肽、蛋白质，上述每种物质的片段和补体，和

b)组分例如探针、抗体、配体、半抗原、和标记物，其通过与a)的物理或化学相互作用表明基因的表达或基因表达产物的存在，并且其中该基因、基因表达产物或组分对应于SEQ ID NO NM_002276、SEQ ID NO NM_002457、和SEQ ID NO M17303。