[发明专利]一种用于蛋白质含量差异测定的方法

权利要求书

1、一种用于蛋白质含量差异测定的方法，其特征在于包括下列步骤：

a.将多种分别结合有不同寡核苷酸序列的蛋白质抗体同时与一种待测蛋白质抗原发生抗原抗体反应；

b.在连接酶的作用下，通过连接反应将步骤a中抗原抗体复合物中的寡核苷酸序列连接在一起，并使连接产物序列中含有一段代表待测蛋白质来源的碱基序列；

c.以步骤b中的连接产物为模板，采用扩增反应扩增一段含有待测蛋白质来源特异性的碱基序列；

d.采用实时测序技术测定步骤c中扩增产物序列中的代表待测蛋白质来源的碱基序列；

e.以步骤d中测得的序列作为待测蛋白质的来源，比较各序列的信号强度就得到待测蛋白质在各来源中的相对含量。

2、根据权利要求1所述的蛋白质含量差异测定方法，其特征在于抗体是指以待测蛋白质为抗原制备的单克隆或多克隆抗体蛋白质。

3、根据权利要求1所述的蛋白质含量差异测定方法，其特征在于抗原抗体反应是指一种抗原同时与该抗原的两种或两种以上的抗体发生的反应。

4、根据权利要求1所述的蛋白质含量差异测定方法，其特征在于多种分别结合有不同寡核苷酸序列的蛋白质是指不同序列的寡核苷酸(DNA)序列的5’端或3’端通过物理或化学的方法与蛋白质结合，形成DNA-蛋白质复合探针。

5、根据权利要求1所述的蛋白质含量差异测定方法，其特征在于一段代表待测蛋白质来源的碱基序列是指标记在抗体蛋白质分子上的寡核苷酸序列中的一段DNA序列。

6、根据权利要求1所述的蛋白质含量差异测定方法，其特征在于一段代表待测蛋白质来源的碱基序列是指在连接反应过程中加入的一段DNA序列。

7、根据权利要求1所述的蛋白质含量差异测定方法，其特征在于扩增反应是指滚环扩增技术(RCA)，聚合酶链式反应(PCR)、链替代扩增(SDA)、连接酶链式反应(LCR)和依赖核酸序列的扩增(NASBA)。

8、根据权利要求1所述的蛋白质含量差异测定方法，其特征在于实时测序技术是指基于生物发光反应的焦测序技术。

9、如权利要求3所述的蛋白质含量差异测定方法，其特征在于两种或两种以上的抗体是指其中至少一种抗体表面结合的寡核苷酸序列的5’端为游离端，并且至少一种抗体表面结合的寡核苷酸序列的3’端为游离端。