[发明专利]一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法。

背景技术

手性药物对映异构体的检查常用的方法有手性高效液相色谱法，通过在流动相中加入手性选择剂或采用手性色谱柱进行分离检查，前者往往分离效果不好，专属性不强，后者色谱柱较贵，成本较高，且色谱柱在使用过程中柱效极易下降造成分离效果不好，加之雷替曲塞及其异构体本身结构中既含有羧基又含有氨基，在液相色谱分析过程中分子内容易绞合，给分离增加了难度；气相色谱法用于手性药物对映异构体的检查要求样品具有一定的挥发性及热稳定性，应用很有局限性。

发明内容

为为解决上述问题，本发明提供了一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法，主要是分离并检测雷替曲塞的单一对映异构体。

本发明是这样实现的，它主要包括样品的制备，毛细管电泳条件及分析方法；它通过毛细管电泳将雷替曲塞及其对映异构体分离，按主成份自身对照法计算雷替曲塞中其对映异构体的限度；用甲醇∶水＝1∶1(体积比)溶液配制备供试品溶液，毛细管电泳的电泳缓冲液为Tris-H₃PO₄，该缓冲液pH值为6.0～10，在该缓冲液中加入手性选择剂和十二烷基硫酸钠。

缓冲液Tris-H₃PO₄的配制是以0.05～0.1M的三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液，用浓度为0.1M的磷酸调节pH值，缓冲液的pH值优选为8。手性选择剂为α-环糊精、β-环糊精、磺化β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、γ-环糊精或者羧甲基-β-环糊精。手性选择剂在缓冲液中的浓度范围为2～20mM，手性选择剂优选为羧甲基-β-环糊精，其浓度为8mM。电泳条件参数为：毛细管长度总长48.5cm，有效长度40cm，毛细管内径为50μm，运行电压为15～30kV，毛细管温度为20～30℃，流体力学进样50mbar 5秒。优选运行电压20kV，毛细管的温度25℃。电极：由‘+’到‘-，检测波长为228nm；在缓冲溶液中加入十二烷基基硫酸钠的浓度为0.01～0.1M，优选浓度是30mM。用甲醇∶水＝1∶1(体积比)溶液配制雷替曲塞手性物分析样品，供试品浓度在50～200μg/ml之间，对映异构体的浓度1μg/ml～100μg/ml。雷替曲塞对映异体的计算方法是配制雷替曲塞供试品溶液及含1％雷替曲塞对映异构体对照品的雷替曲塞的对照品溶液，分别进样，雷替曲塞供试品溶液中对映构体的相应的峰面积不得大于对照溶液中对映异构体的峰面积。

为了保证检测结果的重现性，毛细管第一次使用时，要对其进行冲洗活化，冲洗的程序是先用0.1mol/的NaOH冲洗15分钟，然后用高纯水冲洗10分钟，缓冲液冲洗5分钟。此后每次运行前用运行缓冲液冲洗3分钟。

毛细管电泳法用于手性药物异构体的检查有高效、快速、操作简便、环境友好、样品用量少，成本低，雷替曲塞及其对映异构体能够基线分离等优点，其较高的分离效率使分离选择系数较小的对映异构体可以得到满意的分离效果。用于毛细管电泳手性拆分的选择剂的种类较多，其中以环糊精应用得最广，而且容易得到，在手性拆分中具有广阔的应用前景。

具体实施方式

实施例1

实验在美国Agilent Technologies公司Agilent 3D CE型毛细管电泳仪上进行，流体力学进样，毛细管有效长度40cm，内径50μm的熔融石英毛细管柱。样品的配制过程如下：

配制75mmol/L的三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液，用浓度为0.1M的磷酸调节pH至8.0作为缓冲液，加入8mmol/L羧甲基-β-环糊精(CM-β-CD)和30mmol/L的十二烷基硫酸钠。用甲醇∶水＝1∶1(体积比)溶液分别配制雷替曲塞(s-raltitrexed)溶液及雷替曲塞和其对映异构体(r-and s-raltitrexed)混合溶液，雷替曲塞浓度为50μg/ml。进样前依次用缓冲溶液冲洗3min。实验温度：25℃，检测波长：228nm，流体力学进样50mbar5秒；结果见图1。

实施例2

电泳条件同实施例1。用甲醇∶水＝1∶1(体积比)溶液配制，分别配制系列雷替曲塞(s-raltitrexed)及雷替曲塞对映异构体(r-raltitrexed)溶液，进样，记录响应值为基线噪音3倍的电泳图，即为雷替曲塞及其对映异构体的检测限，其检测限为1μm/ml。结果见图2

实施例3