[发明专利]一种以褶皱臂尾轮虫纯系进行环境监测的方法

权利要求书

1.褶皱臂尾轮虫单克隆纯系建立方法

选择活力较强的褶皱臂尾轮虫单个个体，用虹吸管吸入48孔(6×8)细胞培养板中进行培养，每孔中加入1mL(即1000uL)的淡水小球藻与培养液的混合液。培养时温度保持在25℃。经过7天的培养后，于解剖镜下挑选活力强的子代个体10个，分别放入另一个48孔细胞培养板中进行培养，在这个转移培养过程中逐步添加培养液，使体积恢复为1000uL。再经过7天培养，分别转移轮虫到另一个48孔细胞培养板中进行扩大培养，由此可以建立一个遗传背景相同，来自一个原始轮虫亲本的单克隆纯系。

2.以轮虫死亡数目衡量重金属毒性的方法

利用重金属镉离子(Cd²⁺)对以上建立的纯系褶皱臂尾轮虫进行毒性实验，Cd²⁺浓度梯度设为0.1mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L、2.0mg/L、4.0mg/L六个从低到高的浓度，试验在48孔(6×8)细胞培养板中进行。用以上六种镉离子浓度水体分别对轮虫单个克隆纯系的不同平行组进行毒性试验，连续培养96小时，观察各孔中褶皱臂尾轮虫的死亡情况。于解剖镜(2×10＝20倍镜)下计数，各浓度设置6组平行，2组空白对照(不加入镉离子)，在3h、6h、9h、12h、15h、18h、21h、24h、30h、36h、48h、60h、72h、96h记录褶皱臂尾轮虫个体死亡数目、存活数。以18h时各镉离子浓度下轮虫的死亡数目为观测值，对各镉离子浓度间的处理效应有无进行方差分析检验，并进行多重比较。