[发明专利]卵巢颗粒细胞抗衰老制品、其制备方法及其用途

权利要求书

1.卵巢颗粒细胞抗衰老制品，其特征是含有体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物，以及一种或多种药学上可接受的药用赋形剂和抗氧化剂。

2.根据权利要求1所述的卵巢颗粒细胞抗衰老制品，其特征是所述制品为口服制剂、表皮涂抹的膏剂、液体制剂或阴道栓剂。

3.卵巢颗粒细胞抗衰老制品的制备方法，其特征是将体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物收集、浓缩，添加赋形剂和抗氧化剂。

4.根据权利要求3所述的卵巢颗粒细胞抗衰老制品的制备方法，其特征是按如下步骤操作：

a、获取卵巢颗粒细胞：

无菌条件下取出哺乳动物的卵巢颗粒细胞，400IU/ml透明质酸酶消化颗粒细胞3～5分钟，吸管反复吹打消化后颗粒细胞10～15次，使其分散成单个细胞并经200目滤网过滤，离心洗涤滤过的颗粒细胞两次；

b、获取卵巢颗粒细胞培养上清及细胞提取物：

采用含体积比为10％的胎牛血清的DMEM/F12培养基，步骤a所获取的颗粒细胞用所述培养基重悬，调整细胞密度为2×10⁶/ml接种培养瓶，37℃、体积比为5％的CO₂条件下培养6小时后用所述培养基换液一次，去除死细胞及组织碎片，继续培养至细胞90％融合再用所述培养基换液一次；48小时后收集颗粒细胞培养上清；重量体积比为0.25％的胰蛋白酶消化贴壁颗粒细胞，离心洗涤消化脱落的颗粒细胞两次，加入细胞裂解液裂解颗粒细胞，离心收集上清；或利用传2-6代或冻存复苏的颗粒细胞按照前述方法获取上清；

c、纯化

对步骤b所获得的上清利用柱层析和生物半透膜进行纯化、浓缩，以雌二醇的浓度为标准，调整其含量为200μg/ml，同时加入终浓度为200IU/ml的维生素E。

5.卵巢颗粒细胞在制备抗衰老制品中的应用。

6.根据权利要求5所述的卵巢颗粒细胞在制备抗衰老制品中的应用，其特征是将体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物在制备抗衰老制品中应用。