[发明专利]卵巢颗粒细胞抗衰老制品、其制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及卵巢颗粒细胞抗衰老制品、其制备方法及其用途。

背景技术

卵巢的主要功能是排卵和分泌女性激素，在女性一生中掌控着几件重要的生理事件：青春发育、生儿育女、良好身材和美丽容颜的维持，其中卵巢颗粒细胞发挥了极其重要的作用。随着年龄增长，女性的卵巢功能在45-50岁左右时开始衰退，有些女性因为环境、心理或病理的因素发生卵巢早衰，随后出现一系列更年期症状，例如月经紊乱或绝经，情绪变化，肌肉松弛、弹性降低、没有光泽，继而衰老加速，身体免疫功能发生改变，心血管疾病、骨质疏松、生殖系统肿瘤和神经退行性疾病的发病率上升等，这一系列问题严重影响了女性的生活质量。因此，抗衰老或延缓衰老就成了众多女性追求的目标。

针对卵巢功能衰退传统的治疗方法就是激素替代治疗(HRT)，虽然雌激素单独或雌孕激素联合应用可以改善女性更年期症状，预防骨质疏松等疾病的发生，改善生活质量，但是HRT的弊端也是不容忽视的。HRT已经证实的副作用有撤退性出血，增加卒中、血栓形成和栓塞的风险，引起水钠储留导致体重增加，对于HRT引起子宫内膜癌和乳腺癌的观点还存在争议。权衡利弊，美国FDA和欧洲EMEA都对HRT做出了严格的限定。

颗粒细胞移植治疗虽然从理论上可行，但是组织相容性问题、移植部位、细胞活性及功能、可操作性等问题限制了其临床应用，国内外仅有个例报道，效果还不明确。

在护肤品中添加雌激素或其类似物解决更年期女性出现的皮肤问题，早已有产品问世，深得女性喜爱。但是这些添加剂均采用人工合成的雌、孕激素或从植物提取的雌激素类似物，有效成分比较单一，与生理状态差距较大，不能很好模拟生理状态，效果并不理想，有些甚至有较大的副作用。因此在皮肤抗衰老方面的作用也是十分有限的。

发明内容

本发明为避免上述现有技术所存在的问题，提供一种卵巢颗粒细胞抗衰老制品、其制备方法及其用途，针对卵巢功能减退是女性衰老的根本原因，利用卵巢功能的主要行使者颗粒细胞能够在体外大量增殖、分泌多种生物活性物质，采用近乎女性生理的生物利用度极高的颗粒细胞培养上清及其细胞提取物，通过口服、皮肤吸收及阴道栓剂多途径达到抗衰老之目的。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：

本发明卵巢颗粒细胞抗衰老制品，其特点是含有体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物，以及一种或多种药学上可接受的药用赋形剂和抗氧化剂。

卵巢颗粒细胞抗衰老制品，其特点是所述制品为口服制剂、表皮涂抹的膏剂、液体制剂或阴道栓剂。

本发明卵巢颗粒细胞抗衰老制品的制备方法，其特点是将体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物收集、浓缩，添加赋形剂、抗氧化剂。

本发明卵巢颗粒细胞抗衰老制品的制备方法，其特点是按如下步骤操作：

a、获取卵巢颗粒细胞：

无菌条件下取出哺乳动物的卵巢颗粒细胞，400IU/ml透明质酸酶消化颗粒细胞3～5分钟，吸管反复吹打消化后颗粒细胞10～15次，使其分散成单个细胞并经200目滤网过滤，离心洗涤滤过的颗粒细胞两次；

b、获取卵巢颗粒细胞培养上清及细胞提取物：

采用含体积比为10％的胎牛血清的DMEM/F12培养基，步骤a所获取的颗粒细胞用所述培养基重悬，调整细胞密度为2×10⁶/ml接种培养瓶，37℃、体积比为5％的CO₂条件下培养6小时后用所述培养基换液一次，去除死细胞及组织碎片，继续培养至细胞90％融合再用所述培养基换液一次；48小时后收集颗粒细胞培养上清；重量体积比为0.25％的胰蛋白酶消化贴壁颗粒细胞，离心洗涤消化脱落的颗粒细胞两次，加入细胞裂解液裂解颗粒细胞，离心收集上清；或利用传2-6代或冻存复苏的颗粒细胞按照前述方法获取上清；

c、纯化

对步骤b所获得的上清利用柱层析和生物半透膜进行纯化、浓缩，以雌二醇的浓度为标准，调整其含量为200μg/ml，同时加入终浓度为200IU/ml的维生素E。

本发明卵巢颗粒细胞在制备抗衰老制品中进行应用。

本发明卵巢颗粒细胞在制备抗衰老制品中进行应用，其特点是将体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物在制备抗衰老制品中应用。