[发明专利]碳碳方式连接的双青藤碱衍生物、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种碳碳方式连接的双青藤碱衍生物，通式为：

式中：

R₄＝H或OH(α和β)；

R₂，R₃＝

R₁＝乙基，丙基，丁基，异丙基，烯丙基等直链烃基；或是环戊基，环己基，环庚基等环状烃基；或是β-氟乙基，环丙基甲基，环丁基甲基，苯甲基，吡啶甲基，呋喃甲基，β-苯基乙基，α-甲基苄基，烷氧基甲基，吡唑甲基等取代基。或者是R₁＝R₅S(OO)-其中R₅＝甲基，乙基，丙基，三氟甲基的烃基及取代烃基，苯基及取代基；

或：R₂，R₃＝

R₁＝CH₃，H，R₅为羰基或者羟基；

或：R₂，R₃＝

R₅，R₆＝

R₇，R₈，R₉，R₁₀＝H，C_1-14的饱和及不饱和烷烃基，F，Cl，Br，I，-OH，-NH₂，-OCH₃，-OC₂H₅，-NO₂，-CN，-CF₃，COOCH₃，COPh，COOH，Ph为苯基；

或：R₂，R₃＝

R₁＝CH₃，R₆，R₇＝C_1-14的烷烃及不饱和烷烃基，R₅＝H，O，S，C_1-10的烷基，带有1-3个取代基或者不带取代基的五元或者六元的芳环，含氮杂环，含氧杂环和含硫杂环，所述的取代基是C_1-10的烃基，卤素，C_1-14的烷基或含氟烷基，硝基，腈基，甲氧基或烃基，代表双键或者单键；

或：R₂，R₃＝

R₃＝H，CH₃，酰胺，磺酰胺，杂环等；R₅＝C_1-20的饱和或不饱和烃基)或：R₂，R₃＝

R₃＝H，CH₃，酰胺，磺酰胺，杂环等；R₅＝O，-OH，-NH₂，NHCONH₂，NHCOPh，C_1-20芳烃或者脂肪烃基，R₆＝C_1-20的饱和或不饱和烃基；

或：R₂，R₃＝

R₃＝H，CH₃，酰胺，磺酰胺，杂环；R₅＝C_1-20的饱和或不饱和烃基。

2.权利要求1所述碳碳方式连接双青藤碱衍生物的生物制备方法，其特征在于制备步骤如下：

1)菌株分离：野外采样，稀释涂布分离，选择性筛选，菌种斜面0℃保藏。

2)生物转化产物的制备：活化7天的斜面菌种，转接到发酵培养基中，在25℃，150r/min的摇床上培养4天，加入青藤碱盐酸盐，终浓度≤400μg/ml，同样条件下继续培养1天后加入第二种底物，终浓度≤400μg/ml，相同条件下继续培养4天，停止培养；将发酵液过滤，滤液用NH₄OH调节pH值8～9，用二氯甲烷多次萃取，合并二氯甲烷萃取液，无水NaSO₄干燥，过滤，旋转蒸干溶剂，得转化产物；

3)生物转化产物的分离：采用填充的层析柱为硅胶柱，层析液为100∶0～50∶50V/V氯仿-甲醇混合液，。