[发明专利]实验动物膀胱功能测定方法

权利要求书

1.一种实验动物膀胱功能测定方法，其特征是采用膀胱体部沿膀胱横断面切取的环形肌环进行膀胱功能测定试验。

2.根据权利要求1所述的实验动物膀胱功能测定方法，其特征是包括以下步骤：

a.配置Krebs营养液

以下列成分和浓度配制Krebs营养液：NaCl 118mmol/L，KCl 4.75mmol/L，MgSO₄1.18mmol/L，KH₂PO₄ 1.18mmol/L，NaHCO₃ 24.8mmol/L，葡萄糖10.0mmol/L，CaCl₂ 2.5mmol/L，并调节pH＝7.35；

b.制备逼尿肌肌环

以25％乌拉坦腹腔内注射麻醉大鼠，剪开下腹部取出膀胱，放入4℃kerbs营养液中备用。在膀胱体部沿膀胱横断面切取环形肌环，剔除膀胱粘膜；

c.肌环机械性收缩实验

恒温器官槽内加入10mLkrebs营养液，通入由95％O₂和5％CO₂组成的混合气体，调定温度至37℃，启动powerlab系统，将肌环一端固定于恒温器官槽底部，另一端与拉力传感器感应头相连，并将肌环全部浸没于krebs营养液中；

保持肌环处于无张力的状态，将分析系统的每个通道调零，以排除肌环重量；

逐渐缓慢牵拉肌环使张力增加，直至出现每分钟1次～7次的自发收缩，此时的肌环张力作为自发收缩的张力阈值；

使肌环初始张力保持在0～0.5g之间，再次静置15～30min，待其基线平稳并出现稳定收缩后，连续记录肌条张力变化45min，记录单位时间内期相性收缩峰数目，为自发性收缩频率；连续计算10个收缩峰的收缩幅度，取平均值，为平均收缩力；在该时间段纪录最大收缩幅度，为最大收缩力；

顺次加入浓度分别为1×10^-10、3×10^-10、1×10^-9、3×10^-9、1×10^-8、3×10^-8、1×10^-7、3×10^-7、1×10^-6、3×10^-6、1×10^-5、3×10^-5mol/L的M受体激动剂Carbachol 0.1mL，采用衡压灌流方式保持灌流槽内的液体成分不变，每加一药物浓度后约3～5min出现平台期，此时标记并迅速加下一浓度药物；

d.肌环机械性舒张实验

恒温器官槽内加入10mLkrebs营养液，通入由95％O₂和5％CO₂组成的混合气体，调定温度至37℃，启动powerlab系统，将肌环一端固定于恒温器官槽底部，另一端与拉力传感器感应头相连，并将肌环全部浸没于krebs营养液中；

保持肌环处于无张力的状态，将分析系统的每个通道调零，以排除肌环重量；

加入40mmol/L的KCl，肌环出现收缩，待其到达最大收缩，并达到平台期时，顺次加入浓度分别为1×10^-10，3×10^-10，1×10^-9，3×10^-9，1×10^-8，3×10^-8，1×10^-7，3×10^-7，1×10^-6，3×10^-6，1×10^-5，3×10^-5mol/L的异丙肾上腺素0.1mL，实验过程中采用衡压灌流方式保持灌流槽内的液体成分不变；每加一药物浓度后约3～5min出现平台期，此时标记并迅速加下一浓度药物。