[发明专利]实验动物膀胱功能测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种功能实验方法，具体涉及一种实验动物膀胱功能的测定方法。本方法可以用于测定实验动物膀胱逼尿肌的兴奋性、自律性、收缩能力以及顺应性。

背景技术

膀胱功能为周期性储尿和排尿。在储尿期，达到最大膀胱容量前，膀胱内压较低并维持相对稳定，无逼尿肌收缩；在排尿期，逼尿肌收缩，尿道内、外括约肌协调性松弛，排空膀胱。逼尿肌作为一种存在于膀胱的特殊平滑肌，属于单个单位平滑肌(single-unit smooth muscle)或内脏平滑肌(Visceralsmooth muscle)，该类平滑肌的特点是牵张刺激能够引起肌肉的收缩反应，并且这类平滑肌中还存在少数具有自主节律性的细胞，可以成为起博点，带动整个肌肉的电活动和机械活动。生理学把组织受到刺激后产生动作电位的能力称为兴奋性，刺激量的变化可以反映组织的兴奋性。对于逼尿肌而言，引起逼尿肌自发收缩的机械性张力阈值越小，表明其兴奋性越高。反之，张力阈值越大，其兴奋性越低。另外，肌条在阈刺激下诱发的收缩频率可以反映出逼尿肌的自律性。肌肉的收缩能力是指与负荷无关的、决定肌肉收缩的内在的特性，它的变化直接影响肌肉收缩产生的张力和(或)肌肉缩短的程度以及缩短速度，最大和平均收缩力能够反映逼尿肌收缩能力的变化情况。膀胱的顺应性是反映膀胱壁以最小压力变化换取最大容量的先天能力，顺应性的高低主要随着膀胱的粘弹性和逼尿肌肌张力的改变而改变。膀胱的粘弹性特点可以使膀胱壁伸展所产生的张力在膀胱充盈速度减慢或者停止时降低或者停止，产生所谓的压力释放效应，而当膀胱壁伸展速度超过压力释放速度时，充盈期膀胱内压则有一定升高。膀胱平滑肌、胶原纤维、粘膜及粘膜下肌层的弹性也均可影响膀胱的顺应性。膀胱功能正常的重要标志是在储尿期保持膀胱内低压状态，这与膀胱的舒张功能密切相关。

逼尿肌是一个平滑肌肌束交叉聚集的整体单位，平滑肌束的自由交叉移动调整着膀胱腔内容积压力的变化，实现尿液贮存和排出的功能。不同于血管壁或胃肠道平滑肌呈环行或纵行的分层排列，逼尿肌细胞在膀胱壁的分布是由直径较大的平滑肌细胞交织排列成相对紧密的肌肉束，各束之间自由交叉，没有固定的方向，是不同平面的肌纤维相互交错，呈三维分布。除膀胱颈外，整个膀胱壁尤如肌束编织的网状物，因此，从结构学观点来看，从任何一个切面都难以得到完整的逼尿肌细胞，而这种特殊的结构是与膀胱排尿期逼尿肌细胞能同步而有效地收缩这一功能相适应的。

目前用于评价逼尿肌收缩功能的方法主要有：

1.在体膀胱测压实验

抓起大鼠使直立位，此时大鼠可出现自主排尿。用5％水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg/kg)，仰卧固定，消毒下腹部，耻骨上切口显露膀胱，4_1/2号头皮针穿刺进膀胱作为膀胱测压管，1mL注射器经穿刺针连接导管测定残余尿后，将测压导管经三通管分别与尿动力仪及微量灌注泵相连，腹腔内放置硬膜外导管作为腹压测定管并与尿动力仪的相应连接管相连。以0.2mL/min的速度用生理盐水灌注膀胱，进行充盈性膀胱测压，记录膀胱压力变化与灌注量之间的关系。膀胱的顺应性以灌注量变化与膀胱压力变化的比值表示，膀胱最大容量以出现尿道口连续漏尿时的膀胱灌注量表示。在储尿期出现造成膀胱内压升高超过15cmH₂O柱的逼尿肌收缩波即为逼尿肌不稳定。    

2.离体膀胱测压实验

仰卧位固定大鼠，100mg/kg体重腹腔注射乌拉坦进行麻醉，取下腹正中切口，结扎双侧输尿管，远离膀胱颈部离断尿道，完整取出膀胱，置于37℃，pH＝7.4，充氧(95％O₂，5％CO₂)的Krebs营养液中备用。

取一硬膜外导管，一端经尿道插入离体膀胱并妥善固定，另一端经三通管分别连接微量灌注泵和尿动力仪，作膀胱灌注和测压之用。全部实验过程均在37℃，pH＝7.4，充氧(95％O₂，5％CO₂)的Krebs营养液中进行。首先将离体膀胱温育平衡30min，接着以0.2mL/min的速度用0.9％生理盐水进行膀胱灌注。当膀胱压力上升达到前10min压力的2倍以上时容量为膀胱最大容量。排空膀胱后静置15min，Krebs营养液中加入1mmol/L Carbachol再次进行恒速灌注，当达到最大膀胱容量时记录膀胱压力的变化情况；以0.09mL/min灌注达1/2最大膀胱容量时停止灌注，更换肌槽内Krebs液，加入1mmol ISO作用15min后，观察膀胱压力改变。

3.离体逼尿肌肌条实验