[发明专利]虫荧光素酶

权利要求书

1.一种具有虫荧光素酶活性的蛋白，其为可从萤火虫中获得的虫荧光素酶的突变形式，其特征为对应于螟萤火虫的虫荧光素酶第354位残基或明格列尔萤火虫、十字萤火虫和横纹萤火虫的虫荧光素酶第356位残基的氨基酸残基是非谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸或天门冬氨酸的氨基酸。

2.权利要求1中的蛋白，其特征在于它包含一段氨基酸序列XGDDKPGA，其中X是非谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸或天门冬氨酸的氨基酸残基。

3.权利要求2中的蛋白，其特征在于它包含一段氨基酸序列TPXGDDKPGA，其中X是非谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸或天门冬氨酸的氨基酸残基。

4.权利要求1、2或3中的蛋白，其特征在于氨基酸X是色氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和天门冬酰胺中的一种。

5.权利要求1、2或3中的蛋白，其特征在于氨基酸X是赖氨酸或精氨酸中的一种。

6.一种包含第2号序列中所描述的氨基酸序列的蛋白，其中Xaa是权利要求4或5中所列的一种氨基酸。

7.权利要求1、2、3、6任一权项中的蛋白，其特征为对应于螟萤火虫的虫荧光素酶第215位残基或明格列尔萤火虫、十字萤火虫和横纹萤火虫的虫荧光素酶第217位残基的氨基酸残基是疏水氨基酸。

8.权利要求7中的蛋白，其中疏水氨基酸是异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸中的一种。

9.一种蛋白，其含有第5号序列所示的氨基酸序列，其中Xaa是权利要求4或5中所列的一种氨基酸。

10.编码权利要求1至9任一权项中的蛋白的DNA。

11.权利要求10中的DNA，它包含如第1号序列所描述的核苷酸序列，其中在1063至1065位的三个N碱基形成编码非谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸或天门冬氨酸的氨基酸密码子。

12.权利要求11中的DNA，其中的密码子编码权利要求4或5中所列的氨基酸。

13.权利要求10中的DNA，其包含第1号序列所示的核苷酸序列，其中在1063至1065位的三个N碱基形成编码非谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸或天门冬氨酸的氨基酸的密码子，在646至648位的三个碱基形成编码疏水氨基酸的密码子。

14.权利要求13中的DNA，其中第646和647位的碱基分别是C和T。

15.一种包含编码权利要求1至8任一权项中的蛋白的luc基因的载体。

16.权利要求15中的载体，它可以通过将包含野生型或重组型luc基因的载体进行定点基因突变得到，该突变将编码螟萤火虫的虫荧光素酶第354位的谷氨酸或明格列尔萤火虫、十字萤火虫或横纹萤火虫的虫荧光素酶第356位的谷氨酸的密码子改变成编码其它氨基酸的密码子。

17.权利要求16中的载体，其中其它氨基酸是权利要求4或5中列出的一种氨基酸。

18.权利要求10至12任一权项中的载体，它选自连接了luc基因的pKK223-3、pDR540和pT7-7。

19.一种载体，其含有权利要求10至14任一权项中的DNA。

20.一种可以表达权利要求1至9任一权项中的蛋白的细胞，它含有权利要求10至14任一权项中的DNA或权利要求15-19任一权项中的载体。

21.权利要求20中的细胞，它是大肠杆菌、啤酒酵母或昆虫细胞。

22.一种通过测量ATP来进行检测的测试试剂盒，其特征在于该试剂盒所含的荧光试剂中含有权利要求1至9任一权项中的蛋白。

23.一种检测方法，其中ATP的测量是通过虫荧光素和虫荧光素酶产生光来进行的，所产生光的量与ATP的数量有关，该方法的特征在于虫荧光素酶是权利要求1至9任一权项中的蛋白。

24.权利要求23中的检测方法，其中检测是在30℃至70℃的温度下进行的。

25.权利要求24中的检测方法，其中检测是在37℃至60℃的温度下进行的。